高州油茶人工林碳储量分布特征

郭梦晴; 杨颖; 许叶; 奚如春

doi:10.7671/j.issn.1001-411X.201907018

高州油茶人工林碳储量分布特征

郭梦晴^1,,
杨颖¹,
许叶¹,
奚如春^{1, 2, ,}

1.
华南农业大学林学与风景园林学院，广东广州 510642
2.
广东省森林植物种质创新与利用重点实验室，广东广州 510642

基金项目: 广东省科技计划(2015B020202002)；广东省林业科技创新项目(2018KJCX008)

详细信息

作者简介:
郭梦晴(1994—)，女，硕士研究生，E-mail: 1595213833@qq.com

通讯作者:
奚如春(1963—)，男，教授，博士，E-mail: xirc2003@126.com

中图分类号: S727.32
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出版历程
- 收稿日期: 2019-07-10
- 网络出版日期: 2023-05-17
- 刊出日期: 2020-05-09

Carbon storage and distribution characteristics of Camellia gauchowensis plantation

GUO Mengqing^1,,
YANG Ying¹,
XU Ye¹,
XI Ruchun^{1, 2, ,}

1.
College of Forestry and Landscape Architecture, South China Agricultural University, Guangzhou 510642, China
2.
Guangdong Key Laboratory for Innovative Development and Utilization of Forest Plant Germplasm, Guangzhou 510642, China

摘要

摘要:
目的
探明高州油茶Camellia gauchowensi人工林碳储量及分布特征，并估算评价其固碳效应。

方法
根据样地植株径级分布特征，选取不同径级样株各2~3株，取树叶、树干、树枝、树根、果实、花芽各器官测定生物量和碳含量，并建立各器官生物量模型；在标准地内按“S”形选取8个样点，沿土壤剖面分层采集0～20、20～40、40～60和60～100 cm土层的土壤样品，测定土壤容重与碳含量，计算碳储量。

结果
高州油茶中龄林植株各器官生物量分配比例依次为树干>树根>树叶>树枝>果实>花芽，各器官生物量均随地径的增大而增大。试验林分总生物量为26.902 t·hm⁻²，树体平均碳质量分数为483.45 g·kg⁻¹。同径级各器官的碳含量不同，其中，果实平均碳含量最高。林地100 cm深土层中，土壤碳含量随着土层深度的增加呈明显递减规律，其中，0～20 cm土层碳含量最高，碳质量分数为26.550 g·kg⁻¹。高州油茶林地总碳储量为144.538 t·hm⁻²，其中，树体碳储量为12.857 t·hm⁻²，占总碳储量的8.90%；林地土壤碳储量为131.681 t·hm⁻²，占总碳储量的91.10%。根据中国生物多样性国情报告编写组数据，碳价格为260.90元·t⁻¹，则本试验高州油茶林的碳汇经济效益约为3.8万元·hm⁻²。

结论
高州油茶林分碳储量高于广东省经济林平均碳储量，林地土壤碳储量高于广东省平均土壤碳储量，林分总碳储量高于珠三角森林生态系统碳储量，具有较高的生态效益。高州油茶不仅有较好的生产效益，而且具有十分广阔的固碳前景。
- 高州油茶 /
- 生物模型 /
- 碳储量 /
- 分布特征
Abstract:
Objective
To investigate carbon storage and distribution characteristics of Camellia gauchowensis plantation, estimate and evaluate the effect of carbon sequestration.

Method
Based on the distribution characteristics of basic diameter class in the sample plot, 2 to 3 sample trees were selected in each diameter class. The biomass and carbon content of various organs (leaves, trunks, branches, roots, fruits and flower buds) were measured and their biomass models were established. According to “S” shape in standard plot, eight sampling points were randomly selected to collect soil samples from 0−20, 20−40, 40−60 and 60−100 cm along the soil profile. The bulk density and carbon content of soil samples were determined and the carbon storage was calculated.

Result
The order of biomass allocation ratio of the organs of middle-aged C. gauchowensis plantation was trunks> roots > leaves > branches > fruits > flower buds. All the biomass of various organs increased with the basal diameter. The total biomass of test stand was 26.902 t·hm⁻². The average carbon content of the tree was 483.45 g·kg⁻¹. The carbon contents were different from various organs in the same diameter class, with fruits being the highest. In the soil layers of 100 cm depth in C. gauchowensis forest land, the soil carbon content decreased with the increase of soil depth, with 0−20 cm soil layer being the highest (26.550 g·kg⁻¹). The total carbon storage of C. gauchowensis plantation was 144.538 t·hm⁻², which was 12.857 t·hm⁻² (accounting for 8.90%) and 131.681 t·hm⁻² (accounting for 91.10%) for plant and soil, respectively. According to the authorized data of China biodiversity national condition report, the carbon price is 260.90 CNY per ton, so the economic benefit of the carbon of C. gauchowensi plantation is about 38 000 CNY per hectare.

Conclusion
The carbon storage of C. gauchowensis plantation is higher than that of the average level of non-timber forests in Guangdong, the forest soil carbon storage is higher than the average level in Guangdong, and the total carbon storage of stand is higher than that of forest ecosystem in the Pearl River Delta. C. gauchowensi not only has a good production benefit, but also has a very broad prospect of carbon sequestration.
- Camellia gauchowensis /
- biomass model /
- carbon storage /
- distribution characteristic

HTML全文

动物模型是科学研究不可缺少的工具，受到取材和伦理道德的限制，生物医学必须依靠动物模型进行广泛的试验和评估。小鼠等啮齿类作为经典的模式动物，一些致病突变在小鼠上引起的症状与在人类引起的症状截然相反，这让啮齿类动物模型无法满足人类疾病相关的研究。家兔是标准的生物医学研究动物模型，它繁殖快，体型适中，比小鼠能更真实地模拟人类疾病的发病机制，目前已经成为多种人类疾病模型和发育机制研究模型的首选动物。家兔疾病模型已被开发用于动脉粥样硬化、糖尿病、脂蛋白代谢和心血管疾病^[1]、骨关节炎^[2]、眼病^[3]、病毒感染以及癌症等多种人类疾病的研究。家兔因其胎盘与人的相似性也经常被用作发育生物学的研究模型^[4]，比如发育毒性测试和孕期糖尿病等的相关研究^[5]。

转录激活样效应因子核酸酶(Transcription activator-like effector nuclease, TALEN)技术已经取代锌指核酸酶(Zinc-finger nuclease, ZFN) 技术成为基因组定点靶向修饰的主流技术，并广泛应用于真核细胞以及多种模式生物的科学研究中。2010 年，Sun 等^[6]将全序列合成的 Tale 蛋白与 Fok I 核酸内切酶融合组成TALEN，在人细胞系 HEK293 中对 NTF3 和 CCR5这2个内源基因分别进行了定点敲除，敲除效率达到了39.9%；Tong 等^[7]利用 TALEN 技术在大鼠胚胎干细胞中实现了对 BMPR2 基因的敲除；Carlson 等^[8]在牛和猪中实现了TALEN 介导的多基因敲除；2013 年赖良学团队将 TALEN 技术应用于兔基因敲除研究，建立了世界首例免疫缺陷家兔疾病模型^[9]；2014 年，Liu 等^[10]通过将 3 对 TALEN 的 mRNA 同时注射到食蟹猴胚胎中，成功获得1只Rett 综合症的雌性猴模型。TALEN技术的出现极大地促进了基因定点修饰动物的研究，为这些克隆效率低下又缺少全能胚胎干细胞物种的基因修饰开辟了新渠道。

Tiki1基因在无翅基因 (Wingless/Int1，Wnt)信号通路中作为抑制因子而发挥作用^[11]。在蛙上进行的试验证实了Tiki1在头部诱导过程中起着决定性的作用，Tiki1基因的表达模式与Dickkopf1(DKK1)基因和Goosecoid(Gsc)基因最为接近^[12]。Tiki1基因在小鼠上缺失，而在家兔上表达，Tiki1基因的错误调控还与人类的肿瘤等疾病相关^[13]。Tiki1基因是Wnt信号通路中新的抑制因子，Tiki1、DKK-1、Gsc 这3个基因之间，是否存在协同的相互作用，它们非重叠的那一部分又在生物发育中扮演着什么样的角色，这些问题都需要借助合适的动物模型进行更加深入和完整的研究。本研究拟利用TALEN技术建立Tiki1基因敲除兔模型，来研究Tiki1基因在家兔发育过程中的作用，以填补Tiki1基因在哺乳动物胚胎发育功能研究上的空白。

1. 材料与方法

1.1 材料和试剂

分子试验相关试剂无特殊说明均购自TaKaRa 公司，细胞培养相关试剂无特殊说明均购自 Gibco公司，化学试剂无特殊说明均购自Sigma 公司。兔子为新西兰白兔Oryctolagus cuniculus，普通级，雌性6~8 月龄，体质量2.0~4.5 kg，购自南方医科大学实验动物中心，试验动物生产许可证为[SCXK(粤)2011—0015]。所有的动物试验均按照试验动物使用操作规程进行操作, 试验动物使用许可证为[SYXK(粤)2010—0063]。

1.2 TALEN质粒设计与构建

1.2.1 TALEN质粒设计

家兔Tiki1基因的mRNA由哈佛大学医学院神经学实验室提供，mRNA长度为1 518 bp，有7个外显子。根据Cermak等^[14]给出的靶点设计原则，我们在Tiki1基因上设计了4对TALEN。

1.2.2 TALEN的合成与组装

按照Golden Gate TALEN试剂盒说明书组装如下：比照TALEN靶点序列，分别把Golden Gate TALEN试剂盒前10 个碱基相应的重复可变双残基(Repeat-variable di-residue, RVD)以及载体pFUS_A加入到1个反应体系中；把Golden Gate TALEN试剂盒11~15的碱基相应的RVD以及载体pFUS_B#15加入到1个反应体系中；下游靶点序列按照同样方式操作。

为了减少未连接成环状的dsDNA片段的影响，在连接后向每个体系中加入Plasmid-Safe nuclease，将DNA片段消化掉。

1.2.3 转化

感受态细胞悬液解冻后立即置于冰上。加入上述连接质粒DNA溶液10 μL，42 ℃水浴中热击90 s，热击后迅速置于冰上冷却3~5 min。向管中加入500 μL LB液体培养基(不含Amp)，混匀后37 ℃条件下振荡培养30 min。将上述菌液摇匀后取100 μL涂布于含Amp的筛选平板上，37 ℃条件下培养16~24 h。每个平板挑选1~3 个白斑，进行PCR检测，挑选正确的克隆过夜培养，小量提取质粒鉴定。

1.2.4 体外转录

获得的TALEN质粒需要转录为mRNA并在末端加上Ploy (A)，采用mMESSAGE kit、mMACHINE T7 和Poly(A) polymerase。具体转录步骤根据mMESSAGE kit说明书操作。

1.2.5 RNA加尾修饰

按以下顺序加入用于加尾的试剂：20 μL mMESSAGE mMACHINE T7 Ultra reaction、36 μL Nuclease-free water、20 μL 5×E-PAP缓冲液、10 μL 25 mmol/L MnCl₂溶液、10 μL ATP 溶液。

加入4 μL E-PAP酶，轻轻混匀，37 ℃条件下孵育30~45 min，之后置于冰上。在加入E-PAP酶前先预留出2.5 μL的反应混合液，作为电泳检测是否加尾成功的对照。

1.2.6 RNA产物回收

采用氯化铝沉淀的方式回收RNA。具体步骤如下：加入50 μL的LiCl沉淀液体中止加尾反应和沉淀RNA。4 ℃、12 000 r/min离心15 min，收集RNA颗粒。小心去除上清，用1 mL体积分数为70%的乙醇溶液清洗1次，4 ℃、12 000 r/min离心15 min。小心移去乙醇溶液，重悬于RNAse-free 0.1×TE缓冲液中。利用NanoDrop-1000检测质量浓度，将mRNA稀释到50 ng/μL，每10 μL分装1管储存于−80 ℃冰箱。

1.2.7 TALEN的打靶效率检测

为了验证TALEN的打靶效率，分别以设计的4对TALEN转染家兔胎儿成纤维细胞，转染48 h后，收取该细胞并提取基因组，然后扩增包含靶位点在内的序列，并用T7EⅠ内切酶酶切。

1.3 兔受精卵的显微注射

1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集

对供体母兔注射100 IU的孕马血清促性腺激素(Pregnant mare serum gonadotropin，PMSG)，注射72~120 h后与公兔合笼配种，对于配种成功的母兔进行耳缘静脉注射100 IU的人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin，HCG)，注射18~20 h后对母兔实施安乐死。取出卵巢和输卵管置于预热的1×PBS缓冲液中，然后用冲卵液从输卵管冲出受精卵，挑选原核期前后的受精卵置于胚胎培养液中，38.5 ℃、CO₂体积分数为5%的饱和湿度的培养箱内孵育待用。

1.3.2 显微操作针的制备

固定针的制备：固定针要求外径为0.12 ~0.18 mm，内径为0.02~0.03 mm。具体操作：在酒精灯上加热玻璃管中部，变软后离开火焰并迅速拉开，在外径0.12~0.18 mm处用砂轮切断玻璃针；然后将针安装到锻针仪上，锻针端口受热后逐渐收缩至0.02~0.03 mm，停止加热；在距离针尖0.3~0.4 mm处靠近加热的玻璃球，使玻璃针受热后弯向玻璃球，弯至30°时停止加热。

注射针的制备：胞质内注射针选择带有玻璃芯的玻璃管，利用程序拉针仪拉制，其针尖端封口。与固定管一样，在400 μm左右的位置烤成约30°的弯，便于操作。

1.3.3 受精卵的RNA显微注射

把原核期的受精卵放置在1个操作液滴中，用移液枪将约1 μL的Tiki1-TALEN mRNA沿注射针玻璃管内壁注射到底部，待气泡排出后，将注射针的针尖在固定针上撞开1个开口，调节mRNA流出的流速，可在透明带下调节。将注射针刺入受精卵的胞质内，注入适量的Tiki1-TALEN mRNA，可以看到胞质略有膨胀即可拔出注射针。

1.4 囊胚基因型打靶结果的鉴定

每个囊胚用5 μL的 NP40裂解液在 PCR 仪中进行裂解，然后进行PCR或者巢式PCR来扩增目的片段，并测序鉴定各基因是否打靶。测序结果显示有2套或2套以上峰图的产物克隆到T载体后测序，以确定最终的基因突变情况。

1.5 Tiki1基因敲除兔的制备

为了进一步获得Tiki1基因敲除兔，将50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17个原核期的家兔受精卵胞质中，并将受精卵分别移植到2只受体兔体内，分别编号为1#和2#。统计仔兔出生情况，并检测仔兔的基因突变。

2. 结果与分析

2.1 Tiki1基因TALEN靶位点的设计

根据哈佛大学医学院神经学实验室提供的人Tiki1基因序列，在家兔基因组序列中进行比对，找出家兔上的Tiki1基因，选择其最保守的第2外显子进行TALEN靶位点的设计(图1)，根据GOLD GATE TALEN试剂盒说明书合成了4条TALEN，分别命名为L1、L2、R1和R2，这4条TALEN可以组合成4 对TALEN，TALEN组合命名为L1R1、L1R2、L2R1和L2R2。以此4对TALEN转染家兔胎儿成纤维细胞，T7EⅠ内切酶酶切图如图2所示，从图2中可以看出以L1R1组合转染家兔胎儿成纤维细胞提取的基因组扩增的PCR产物可以经T7EⅠ内切酶切出2条带，其他组合的未见明显条带，说明在这4种TALEN组合中，L1R1打靶效率最高。因此，选择L1R1对家兔Tiki1基因进行打靶研究。

图 1 Tiki1基因TALEN靶位点

加下划线的序列表示靶位点

Figure 1. Target sites for TALEN of Tiki1 gene

The underlined sequences represent the target sites

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图 2 4 对TALEN打靶效率酶切检测电泳图

NT为阴性对照；箭头所指为T7EⅠ内切酶切开的2个片段条带

Figure 2. Electrophoregram detecting targeting efficiency of four pairs of TALEN by enzyme digestion

NT is negative control; The arrows point at two fragments generated by the T7E I endonuclease

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2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的体外发育结果

选取原核期受精胚胎，分别以10和50 ng/μL的质量浓度将Tiki1-TALEN mRNA注射到处于原核期的家兔受精卵的胞质内，统计发育到囊胚期的受精卵，计算囊胚率，检测注射的RNA对胚胎发育是否存在影响。结果见表1，当以10 ng/μL的质量浓度注射时，囊胚率为64%；当以50 ng/μL的质量浓度注射时，囊胚率为57%；对照组以相同量的H₂O注射，囊胚率为82%。结果表明，试验组与对照组相比囊胚发育率稍有降低，但统计学差异均不显著，说明注射的mRNA对囊胚的发育会有影响但可以忽略，而且注射mRNA组的囊胚率都在50%以上，所以并不会影响基因修饰兔的建立。

表 1 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔胚胎的体外发育结果

Table 1. Results of in vitro development of rabbit embryos after injection with Tiki1-TALEN mRNA

ρ(mRNA)/ (ng·µL⁻¹)	注射胚胎数 No. of embryos injected	囊胚数 No. of blastocysts	囊胚率/% Percentage of blastocysts	P¹⁾
10	11	7	64	0.635 1
50	14	8	57	0.208 7
0 (H₂O, CK)	11	9	82
1)第5列为与CK组囊胚率比较的P值(Fisher’s精确检验) 　1)The fifth column shows P values when compared with the percentage of blastocysts in CK group (Fisher’s exact test)

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2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修饰情况

基因打靶效率检测结果如表2所示。注射10 ng/μL Tiki1-TALENs mRNA后所获得的7 个囊胚中，有1个囊胚(14.3%)发生了基因打靶，进一步进行基因型的深度分析，发现该囊胚除了检测到该基因存在碱基缺失外，还能检测到野生型(WT)序列，为单等位基因敲除；注射50 ng/μL Tiki1-TALENs mRNA后所获得的8个囊胚中，100%发生了基因打靶，进一步进行基因型的深度分析，全部都只发生了单等位基因敲除，没有检测到双等位基因敲除。在以上9个发生基因打靶的囊胚中，存在5种基因突变方式，分别为缺失1、6、10、15和28 bp碱基，具体突变位置见图3。注射50 ng/μL Tiki1-TALEN mRNA试验组的囊胚基因修饰效率显著高于10 ng/μL注射组(P=0.001 4，Fisher’s精确检验)。综上，结合囊胚率和打靶效率考虑，我们选择以50 ng/μL质量浓度的Tiki1-TALEN mRNA注射家兔受精卵制备基因打靶兔。

表 2 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修饰结果

Table 2. Modified results of Tiki1 gene in fertilized eggs of rabbits after injection with Tiki1-TALEN mRNA

ρ(mRNA)/ (ng·µL⁻¹)	囊胚数 No. of blastocysts	发生基因修饰囊胚数 No. of modified blastocysts	基因修饰效率/% Gene modification efficiency	单等位基因敲除数 No. of mono-mutant	单等位基因敲除率/% Rate of mono-mutant	双等位基因敲除数 No. of alle-mutant	双等位基因敲除率/% Rate of alle-mutant
10	7	1	14.3	1	14.3	0	0
50	8	8	100	8	100	0	0

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图 3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因的碱基突变

WT为野生型，P1~P5代表5种不同的基因突变型；短横线表示缺失的碱基，加下划线的序列表示靶位点

Figure 3. Base mutation of Tiki1 gene in fertilized eggs of rabbits after injection with Tiki1-TALEN mRNA

WT is wildtype, P1-P5 represent five different types of gene mutation; The short dashes represent the missing bases, and the underlined sequences represent the target sites

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2.4 注射胚胎移植受体怀孕和仔兔出生结果

将50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到17枚原核期的家兔受精卵胞质中，分别移植到2只受体兔体内，共计出生3个活的仔兔，编号为1#-1、2#-1和2#-2(表3)。测序分析其基因型发现1#-1和2#-2仔兔在靶位点处出现双峰(图4)，说明发生了基因打靶；2#-1仔兔测序结果为单峰(图4)，进一步比对该测序结果发现其为WT型，说明未发生基因打靶。回收测序结果在靶位点附近存在套峰的2只仔兔(1#-1和2#-2)的PCR 产物，与T载体连接测序，再与WT序列进行比对。结果表明，对于仔兔1#-1，Tiki1基因除了检测到WT型序列外，还在靶位点发生了基因敲除，具体突变方式为插入1 bp的同时删减了9 bp；对于仔兔2#-2，Tiki1基因除了检测到WT型序列外，还在靶位点发生了基因敲除，具体突变方式为删减22 bp(图5)。以上结果表明，我们建立了Tiki1基因敲除兔模型，但是这些基因敲除兔仍存在正常的Tiki1基因序列，说明这些打靶兔可能是单基因敲除或者是嵌合体。

表 3 基因打靶仔兔出生统计

Table 3. Birth summary of gene targeted baby rabbits

受体编号 Recipient No.	ρ(mRNA)/ (ng·µL⁻¹)	移植胚胎数 No. of embryos transferred	出生仔兔数 No. of newborn rabbits	基因修饰兔数量 No. of gene-modified rabbits	基因修饰兔占比/% Percentage of gene-modified rabbits	双等位基因敲除兔数 No. of rabbits with biallelic knockout
1#	50	7	1	1	100	0
2#	50	10	2	1	50	0
合计 Total		17	3	2	67	0

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图 4 仔兔Tiki1基因测序峰图

Figure 4. Sequencing peak map of Tiki1 gene in baby rabbit

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图 5 仔兔Tiki1基因的碱基突变

WT为野生型，1#-1和2#-2为仔兔编号；短横线表示缺失的碱基，蓝色小写字母表示插入的碱基，加下划线的序列表示靶位点

Figure 5. Base mutations in Tiki1 genes of baby rabbits

WT is wildtype, 1#-1 and 2#-2 are indentifying numbers for baby rabbits; The short dashes represents the missing base, the blue lowercase letter represents the inserted base, and the underlined sequences represent the target sites

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3. 讨论与结论

Tiki1基因是哈佛大学儿童医学院贺熹教授团队发现在Wnt信号通路中作为抑制因子而发挥作用的一个基因，抑制其表达会导致蛙胚中头部发育的缺失^[11]。Tiki1基因在小鼠体内缺失，因而无法在小鼠体内研究其功能，而家兔中该基因能够表达^[15]。基于Tiki1基因的特殊性，即Tiki1基因在啮齿类动物，如小鼠、大鼠体内缺失，使用小鼠作为研究人类 Tiki1基因缺失的疾病模型这一传统途径被阻断，而兔由于心血管系统与人类非常相似，因此成为研究 Tiki1 基因极佳的哺乳动物。

本研究利用自身常年做基因编辑兔的技术优势试图探索Tiki1基因对兔早期胚胎发育的影响。我们首先基于TALEN系统设计了靶向兔Tiki1基因的打靶载体，然后分别将10和50 ng/μL的Tiki1-TALEN mRNA注射到原核期的家兔受精卵胞质中，并进行囊胚率和基因修饰效率的统计，检测所设计的Tiki1-TALEN mRNA对胚胎发育是否存在影响以及能否高效地对胚胎进行基因修饰。结果表明，当以10 ng/μL的质量浓度注射时，囊胚率为64%，对照组以相同量的H₂O注射，囊胚率为82%，试验组与对照组相比囊胚发育稍差但无明显统计学差异。当以50 ng/μL的质量浓度注射时，囊胚率为57%，该试验组与对照组相比囊胚发育稍差，但无明显统计学差异，说明注射的mRNA对囊胚的发育没有明显影响，而且后续只要在胚胎移植时多移植几枚胚胎不影响获得想要的基因修饰兔。注射50 ng/μL mRNA试验组的囊胚率(57%)与注射10 ng/μL mRNA试验组的囊胚率(64%)相比影响不大，但注射50 ng/μL mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(100%)与注射10 ng/μL mRNA试验组的囊胚基因修饰效率(14.3%)相比显著提高，这有助于提高后续获得阳性的Tiki1基因修饰兔子的效率，所以后续试验选择了以50 ng/μL的质量浓度注射来高效获得基因修饰兔，后续将进一步获得纯合子以检测其是否影响胚胎的后期发育或者成体发育。

图 1 高州油茶人工林土壤有机碳含量垂直分布

Figure 1. Vertical distribution of soil organic carbon content in Camellia gauchowensi plantation

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表 1 高州油茶人工林标准地林分调查结果

Table 1 Result of survey in sample plots of Camellia gauchowensi plantation

径级/cm Diameter class	植株密度/ (株·hm⁻²) Plant density	株数总林分占比/% Percentage of plants number	地径/cm Basal diameter			树高/m Height			冠幅/m² Canopy diameter
径级/cm Diameter class	植株密度/ (株·hm⁻²) Plant density	株数总林分占比/% Percentage of plants number	最大值 Max.	最小值 Min.	平均值 Average	最大值 Max.	最小值 Min.	平均值 Average	最大值 Max.	最小值 Min.	平均值 Average
4	242	14.76	4.98	4.48	4.70±0.24	3.10	2.41	2.74±0.28	2.95	0.72	1.99±0.90
6	309	18.85	6.99	5.06	6.99±0.51	4.36	1.83	3.04±0.88	5.84	0.79	2.61±0.90
8	556	33.92	8.99	7.01	7.01±0.61	6.15	1.97	3.23±0.69	7.21	0.99	3.57±1.19
10	389	23.74	10.99	9.02	9.02±0.59	6.50	2.07	3.57±0.88	8.82	1.47	4.80±1.51
12	143	8.73	12.79	11.02	11.02±0.67	6.63	2.35	3.85±0.86	14.00	2.72	5.39±1.44

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表 2 高州油茶人工林各器官生物量模型拟合

Table 2 Fitness of biomass models for each organ in Camellia gauchowensi plantation

器官　　　 Organ	回归方程¹⁾ Regression equation	决定系数(R²) Determination coefficient	P
树叶 Leaf	W=0.023D^2.191	0.847	<0.001
树枝 Branch	W=0.200D^2.154	0.880	<0.001
树干 Trunk	W=0.022D^2.622	0.972	<0.001
树根 Root	W=0.067D^2.099	0.912	<0.001
果实 Fruit	W=0.004D^2.751	0.758	<0.001
1)回归方程中，W为生物量，D为地径　1)In regression equation, W is biomass, D is basal diameter

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表 3 高州油茶人工林不同径级各器官生物量及其分配

Table 3 Biomass and distribution of each organ in different diameter classes of Camellia gauchowensi plantation

径级/cm Diameter class	生物量/(t·hm⁻²) Biomass							全株生物量占比/% Percentage of plant biomass
径级/cm Diameter class	树叶 Leaf	树枝 Branch	树干 Trunk	树根 Root	果实 Fruit	花芽 Flower bud	全株合计 Total plant	全株生物量占比/% Percentage of plant biomass
4	0.155	0.135	0.316	0.528	0.088	0.010	1.232	4.58
6	0.555	0.400	0.855	0.835	0.308	0.116	3.069	11.41
8	1.039	0.788	2.290	2.176	0.479	0.146	6.918	25.71
10	1.574	0.888	3.587	3.402	0.861	0.566	10.878	40.43
12	0.500	0.668	1.598	1.539	0.454	0.050	4.809	17.88
合计 Total	3.822	2.878	8.646	8.479	2.189	0.888	26.902	100.00

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表 4 高州油茶人工林各器官生物量及总生物量占比

Table 4 Biomass and its proportion of each organ in Camellia gauchowensi plantation

器官　　 Organ	生物量/(t·hm⁻²) Biomass	占比/% Percentage
树叶 Leaf	3.822	14.21
树枝 Branch	2.878	10.70
树干 Trunk	8.646	32.14
树根 Root	8.479	31.52
果实 Fruit	2.189	8.14
花芽 Flower bud	0.888	3.30
合计 Total	26.902	100.00

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表 5 高州油茶人工林不同样株各器官碳含量

Table 5 Carbon contents of different organs in different sample plants of Camellia gauchowensi plantation

样株号 Sample plant	径级/cm Diameter class	w(C)/(g·kg⁻¹)
样株号 Sample plant	径级/cm Diameter class	树叶 Leaf	树枝 Branch	树干 Trunk	树根 Root	果实 Fruit	花芽 Flower bud	均值 Average
1	4	493.40	487.35	478.10	469.87	486.88	490.15	484.29
2	4	501.89	483.58	473.31	463.95	508.42	484.09	485.87
3	6	482.01	485.50	474.22	458.95	481.22	481.93	477.31
4	6	496.24	485.92	478.60	466.53	506.52	488.35	487.03
5	8	483.98	482.98	476.51	465.45	483.82	484.20	479.49
6	8	494.03	485.95	480.74	472.39	497.21	490.08	476.51
7	8	480.16	473.17	470.12	462.43	484.72	488.45	476.51
8	10	496.12	487.89	481.44	466.24	501.22	489.01	486.99
9	10	481.44	481.57	481.51	464.54	521.39	483.92	485.73
10	10	482.25	483.27	478.45	462.66	492.45	482.89	480.33
11	12	497.12	478.85	467.22	459.06	500.55	490.83	482.27
12	12	494.90	491.75	479.49	480.40	493.86	492.87	488.88
均值¹⁾ Average		490.30b	483.98cd	476.64d	466.04e	496.52a	487.23c	483.45
1)该行数据后的不同小写字母表示差异显著(P<0.05，Duncan’s法) 　1)Different lowercase letters in the row indicate significant differences (P<0.05，Duncan’s test)

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表 6 高州油茶人工林各器官碳储量分布

Table 6 Carbon storage distribution of various organs in Camellia gauchowensi plantation

器官　　　 Organ	碳储量/(t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage
树叶 Leaf	1.868	14.53
树枝 Branch	1.393	10.84
树干 Trunk	4.127	32.10
树根 Root	3.950	30.72
果实 Fruit	1.088	8.47
花芽 Flower bud	0.431	3.35
合计 Total	12.857	100.00

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表 7 高州油茶人工林不同土层土壤有机碳储量

Table 7 Soil organic carbon storages of different soil layers in Camellia gauchowensi plantation

取样点 Sample point	0~20 cm		20~40 cm		40~60 cm		60~100 cm		总碳储量/ (t·hm⁻²) Total carbon storage
取样点 Sample point	碳储量/ (t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage	碳储量/ (t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage	碳储量/ (t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage	碳储量/ (t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage	总碳储量/ (t·hm⁻²) Total carbon storage
1	60.694	44.91	20.457	15.14	20.306	15.02	33.691	24.93	135.149
2	67.061	54.31	32.058	25.96	16.321	13.22	8.040	6.51	123.480
3	62.644	34.26	46.490	25.42	29.681	16.23	44.060	24.09	182.874
4	53.546	54.88	18.374	18.83	10.494	10.76	15.155	15.53	97.569
5	68.948	63.30	11.286	10.36	8.571	7.87	20.116	18.47	108.921
6	53.985	46.61	30.693	26.50	15.520	13.40	15.617	13.48	115.815
7	74.308	45.09	35.120	21.31	21.696	13.16	33.680	20.44	164.803
8	61.478	49.25	24.254	19.43	13.529	10.84	25.581	20.49	124.841
均值 Average	62.833	49.08	27.341	20.37	17.015	12.56	24.493	17.99	131.681

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表 8 高州油茶人工林总有机碳储量及分配

Table 8 Organic carbon storage and distribution of Camellia gauchowensi plantation

林地组成 Stand land composition	碳储量/(t·hm⁻²) Carbon storage	占比/% Percentage
林分 Stand	12.857	8.90
土壤层 Soil layer	131.681	91.10
合计 Total	144.538	100.00

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参考文献(25)

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施引文献(3)

期刊类型引用(1)

刘红，成艳君，周永红，李雪梅. 卵母细胞敲除Rictor对纺锤体和早期胚胎发育的影响. 生殖医学杂志. 2022(12): 1722-1727 .

百度学术

其他类型引用(2)

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图(1) / 表(8)

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1. 材料与方法
1.1 材料和试剂
1.2 TALEN质粒设计与构建
1.2.1 TALEN质粒设计
1.2.2 TALEN的合成与组装
1.2.3 转化
1.2.4 体外转录
1.2.5 RNA加尾修饰
1.2.6 RNA产物回收
1.2.7 TALEN的打靶效率检测
1.3 兔受精卵的显微注射
1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集
1.3.2 显微操作针的制备
1.3.3 受精卵的RNA显微注射
1.4 囊胚基因型打靶结果的鉴定
1.5 Tiki1基因敲除兔的制备
2. 结果与分析
2.1 Tiki1基因TALEN靶位点的设计
2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的体外发育结果
2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修饰情况
2.4 注射胚胎移植受体怀孕和仔兔出生结果
3. 讨论与结论

1. 材料与方法
1.1 材料和试剂
1.2 TALEN质粒设计与构建
1.2.1 TALEN质粒设计
1.2.2 TALEN的合成与组装
1.2.3 转化
1.2.4 体外转录
1.2.5 RNA加尾修饰
1.2.6 RNA产物回收
1.2.7 TALEN的打靶效率检测
1.3 兔受精卵的显微注射
1.3.1 母兔的超排和受精卵的收集
1.3.2 显微操作针的制备
1.3.3 受精卵的RNA显微注射
1.4 囊胚基因型打靶结果的鉴定
1.5 Tiki1基因敲除兔的制备
2. 结果与分析
2.1 Tiki1基因TALEN靶位点的设计
2.2 注射Tiki1-TALENs mRNA后家兔受精胚的体外发育结果
2.3 注射Tiki1-TALEN mRNA后家兔受精卵Tiki1基因修饰情况
2.4 注射胚胎移植受体怀孕和仔兔出生结果
3. 讨论与结论

参考文献(25)

施引文献(3)

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高州油茶人工林碳储量分布特征

作者简介: 郭梦晴(1994—)，女，硕士研究生，E-mail: 1595213833@qq.com

通讯作者: 奚如春(1963—)，男，教授，博士，E-mail: xirc2003@126.com

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