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    房红莹,陈钜豪,张欣,胡寻,罗满林. 牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 华南农业大学学报, 2009, 30(1). DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2009.01.021
    引用本文: 房红莹,陈钜豪,张欣,胡寻,罗满林. 牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达[J]. 华南农业大学学报, 2009, 30(1). DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2009.01.021
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    FANG Hong-ying,CHEN Ju-hao,ZHANG Xin,HU Xun,LUO Man-lin. Cloning and Expression of Bovine Interleukin-15 in Escherichia coli[J]. Journal of South China Agricultural University, 2009, 30(1). DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2009.01.021
    Citation: FANG Hong-ying,CHEN Ju-hao,ZHANG Xin,HU Xun,LUO Man-lin. Cloning and Expression of Bovine Interleukin-15 in Escherichia coli[J]. Journal of South China Agricultural University, 2009, 30(1). DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.2009.01.021
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    牛白细胞介素15基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

    Cloning and Expression of Bovine Interleukin-15 in Escherichia coli

      摘要
    • 摘要: 根据GenBankTM中发表的牛IL-15基因序列设计并合成了特异性引物,以经LPS和ConA刺激的牛外周血单个核细胞提取的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出长度约500 bp的目的基因片段,并将该基因克隆到pMD18-T载体上.酶切、PCR及序列测定结果表明,获得了牛IL-15全长基因的克隆.进一步通过PCR方法得到缺失其N端48个氨基酸的信号肽序列的牛IL-15成熟蛋白基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a上,构建重组表达质粒pET-IL-15,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,该菌表达以包涵体形式存在的相对分子质量约为33 000的融合蛋白.用Ni螯合层析方法纯化表达的蛋白.Western-blot试验显示表达的重组融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应,同时也能与鼠抗猪IL-15的多克隆抗体发生明显交叉反应.

       

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