木瓜凝乳蛋白酶的单链单甲氧基聚乙二醇修饰产物的检测与分析

    The determination and analysis of 2-(O-methoxypolyethyleneglycol)-4,6-dichloro-S-triazine -modified chymopapain

    • 摘要: 在底物保护下,采用三聚氰氯活化的单链单甲氧基聚乙二醇(mPEG1)对木瓜凝乳蛋白酶(Cp)进行了共价修饰,反应混合物经毛细管电泳(CE)分析及Sephadex G-75分离纯化获得修饰度为平均每分子Cp偶联3~4个mPEG1长链的修饰纯酶(mPEG1-Cp).以三硝基苯磺酸(TNBS)法与CE法作对比测定了该修饰酶的平均氨基修饰度;以-ELISA法检测mPEG1-Cp的抗原性;用紫外吸收光谱和荧光发射光谱对mPEG1-Cp进行了结构的测定分析.结果表明:Cp的mPEG1修饰产物经毛细管电泳检测为多组分体系,最大产物峰为平均每分子Cp偶联3~4个mPEG1的低修饰度修饰酶,其相对分子质量为40712~46044;该修饰酶抗原抗体结合能力完全消失,体内活性半衰期是原酶的1.6倍,同时酶活力保持在36.5%;紫外吸收光谱和荧光发射光谱分析表明:mPEG1-cp结构有轻度的改变.

       

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