Identification of the pathogen causing Trichosanthes kirilowii fruit rot and screening of fungicides
-
摘要:目的
明确引起栝楼果实腐烂病的病原菌种类并筛选其有效防治药剂。
方法2019—2020年采集安徽省大别山区的栝楼果实腐烂病样品，采用组织分离法获得35株分离物，利用柯赫氏法则验证其致病性，依据菌株形态学特征和多基因序列分析确定病原菌种类；采用菌丝生长速率法测定7种杀菌剂的室内毒力。
结果共分离纯化得到4种不同菌落形态特征的菌株，经柯赫氏法则验证均为栝楼果实腐烂病病原菌，经形态学观察和分子系统发育分析，确定引起栝楼果实腐烂病的病原菌分别为藤仓镰孢菌Fusarium fujikuroi、层出镰孢菌F. proliferatum、果生刺盘孢Colletotrichum fructicola和辽宁刺盘孢C. liaoningense，分离频率依次为31.4%、8.6%、20.0%和40.0%。室内毒力测定结果表明，咪鲜胺、咯菌腈、苯醚甲环唑、氰烯菌酯和百菌清对F. fujikuroi和F. proliferatum的抑制效果较好，EC50为0.1046 ~ 5.1781 μg/mL；咪鲜胺、苯醚甲环唑和咯菌腈对C. fructicola和C. liaoningense的抑制效果较好，EC50为0.0097 ~ 2.1325 μg/mL。
结论栝楼果实腐烂病主要由镰孢菌属和刺盘孢属真菌侵染引起，咪鲜胺、苯醚甲环唑和咯菌腈对引起该病害的病原菌具有较好的抑制效果。
Abstract:ObjectiveTo clarify the pathogen causing Trichosanthes kirilowii fruit rot and screen effective fungicides for controlling the disease.
MethodSamples of rot fruit from T. kirilowii plants were collected from Dabie Mountain Areas, Anhui Province in 2019—2020. A total of 35 representative isolates were obtained by tissue isolation. The pathogenicity was verified according to the Koch’s postulate, and the causal agents were identified based on the morphological characteristics and multilocus sequence analysis. The indoor toxicity of seven fungicides against the pathogen was detected by the mycelium growth rate method.
ResultColonies with four different morphological characteristics were isolated and purified. The isolates were confirmed to be pathogenic to the fruit of T. kirilowii according to the Koch’s postulate. They were identified as Fusarium fujikuroi, F. proliferatum, Colletotrichum fructicola and C. liaoningense by combining morphological characteristics with phylogenetic analysis, with isolation frequencies of 31.4%, 8.6%, 20.0% and 40.0%, respectively. In addition, the indoor toxicity test results indicated that prochloraz, fludioxonil, difenoconazole, phenamacril and chlorothalonil had better inhibitory effect against F. fujikuroi andF. proliferatum, with EC50 ranging from 0.1046 to 5.1781 μg/mL. Prochloraz, fludioxonil and difenoconazole had better inhibitory effect againstC. fructiicola and C. liaoningense with EC50 ranging from 0.0097 to 2.1325 μg/mL.
ConclusionThe causal agents associated with fruit rot disease on T. kirilowii are Fusarium spp. and Colletotrichum spp.. Prochloraz, fludioxonil and difenoconazole all show good inhibitory activity against the pathogens.
-
Keywords:
- Trichosanthes kirilowii /
- Fruit rot disease /
- Fusarium /
- Colletotrichum /
- Pathogenicity /
- Fungicide screening
-
近年来，养鹅业蓬勃发展，但由于鹅饲料的短缺，一些养殖户为追求肉鹅快速增长，用蛋白质含量较高的鸡、鸭饲料代替鹅饲料，经常引发雏鹅痛风[1]。禽痛风的致病原因较为复杂，达20多种[2]，如饲料中含高蛋白质[3]、高钙，维生素A缺乏[4]，饮水不足，环境中空气污浊，霉菌毒素中毒，磺胺类药物中毒[5]以及感染能够损害肾脏的疾病(传染性法氏囊病、传染性肾炎、鸡白痢、球虫病等)[6-7]。临床上最常见的是饲喂鸡饲料和鸭饲料引起的鹅痛风。美国全国科学研究委员会(1994)建议0~4周龄鹅的粗蛋白需求量为15%，前苏联畜牧科学研究所(1985)建议0~3周龄鹅对蛋白的需求量为17%，而鸡、鸭饲料中蛋白质质量分数为22%~23%，超出鹅的营养需求，过量的蛋白质在体内代谢生成黄嘌呤，黄嘌呤在黄嘌呤氧化酶的作用下转化成尿酸，血液中蓄积过多尿酸不能迅速排出体外，则会引起高尿酸盐血症[8]，进而引发痛风。鸡、鸭饲料引起鹅痛风的临床病例有不少报道，关于其致病机理的研究较少。因此，本研究从鹅生长性能、肝肾功能、组织病理学变化和致炎因子等方面，初步探讨高蛋白饲料引发鹅痛风的机理。
1. 材料与方法
1.1 试验饲粮与试验设计
基础饲粮参照鹅的营养需要[9]制备，风干后饲粮营养组成及含量见表1。
表 1 试验饲粮营养组成与含量1)Table 1. Nutrient compositions and levels of experimental diets项目 Item 组成 Component 组别 Group A B C 原料及质量分数/%
Ingredient content玉米 Corn 46.00 42.00 36.45 小麦次粉 Wheat midding 15.00 13.90 13.79 米糠 Rice bran 20.00 18.53 17.06 蛋白粉 Albumen powder 0 7.35 14.70 玉米胚芽粕 Corn germ meal-so1 4.00 4.00 4.00 酒糟蛋白饲料 Distillers dried grains with solubles 9.00 8.22 8.00 石粉 Stone powder 0.72 0.72 0.72 玉米蛋白粉 Corn gluten meal 3.00 3.00 3.00 预混料1) Premix 2.28 2.28 2.28 合计 Total 100.00 100.00 100.00 营养成分及质量分数/%
Nutrient content粗蛋白质2) Crude protein 16.00 20.00 24.00 钙 Ca 1.10 1.10 1.10 有效磷 Available phosphorous 0.65 0.65 0.68 粗纤维 Crude fiber 6.80 6.60 6.40 粗灰分 Ash 9.00 9.00 9.10 氯化钠 NaCl 0.50 0.50 0.50 水分 Water 13.00 13.00 13.00 蛋氨酸 DL-Methionine 0.50 0.51 0.52 代谢能/(MJ·kg–1)
Metabolic energy2.70 2.69 2.70 1) 预混料为每千克饲料提供: 维生素A 1.4×105 IU, 维生素D3 6×104 IU, 维生素E 100 IU, 维生素K3 28 mg, 维生素B1 12 mg, 维生素B2 62 mg, 维生素B6 18 mg, 维生素B12 0.12 mg, 维生素B5 100 mg，维生素B3 3 180 mg，维生素B9 11.6 mg，维生素B7 1.6 mg，胆碱 5 000 mg，Mn 900 mg，Zn 1 000 mg，Fe 1.3 g，Cu 250 mg，Se 4.5 mg，I 7 mg，赖氨酸 25 000 mg，w(Ca) 9%，w(P) 3%，w(H2O) 12%
1) The premix provided the following per kilogram of diet: Vitamin A 1.4×105 IU, vitamin D3 6×104 IU, vitamin E 100 IU, vitamin K3 28 mg, vitamin B1 12 mg, vitamin B2 62 mg, vitamin B6 18 mg, vitamin B12 0.12 mg, vitamin B5 100 mg，vitamin B3 3 180 mg，vitamin B9 11.6 mg，vitamin B7 1.6 mg，choline 5 000 mg，Mn 900 mg，Zn 1 000 mg，Fe 1.3 g，Cu 250 mg，Se 4.5 mg，I 7 mg， Lys 25 000 mg，w(Ca) 9%，w(P) 3%，w(H2O) 12%试验选用体质量相近的1日龄雏雁鹅72只，随机分成A、B和C组，每组3个重复，每个重复8只鹅。A组饲喂粗蛋白质量分数为16%的基础饲粮，B组饲喂粗蛋白质质量分数为20%的饲粮，C组饲喂粗蛋白质质量分数为24%的饲粮，试验期为14 d。
1.2 饲养管理
试验在安徽农业大学动物科技学院动物房进行。各组间试验鹅分笼饲养，试验期间分别于每天08:00、14:00和21:00喂料，试验鹅自由采食，自由饮水。消毒、卫生防疫和日常管理按照规模化养禽场常规饲养方法进行。每日观察并记录每组雏鹅的精神状态、采食情况和排便情况等。
1.3 样品采集与处理
于试验开始第1天早晨，逐只称量试验鹅的体质量，同时以笼为单位每天准确记录投料量、剩料量和耗料量，计算各组间体质量变化、所耗饲料量与体质量增加之比。试验第14天，每组随机选取10只试验鹅，空腹8 h后颈静脉采血3 mL，室温倾斜静置30 min，3 000 r·min–1离心15 min后分离血清，检测生化指标。试验第1、7和14天，按组别逐只称量体质量。取新鲜肝脏、肾脏组织，分成3部分。一部分测炎症因子；一部分固定于体积分数为10%的福尔马林溶液中，24 h后经冲水、梯度乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋等处理后，以5 μm的厚度切片，常规苏木精–伊红(HE)染色，普通显微镜下观察并拍照；另一部分取1 cm3肝脏、肾脏组织若干块，固定到体积分数为2.5%的戊二醛溶液中，经脱水、包埋、切片和电子染色(铅、铀染色)等处理后，用日产JEM-1230型透射电镜观察并拍照。
1.4 指标测定
1.4.1 血清生化指标水平测定
检测各组鹅血清中尿酸、白蛋白、球蛋白、总蛋白、尿素氮、总胆红素的含量以及碱性磷酸酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ−谷氨酰转移酶活性，37 ℃条件下，每分钟释放1 mmol产物所需的酶量定义为1个酶活力单位(U)。采用迈瑞BS-220全自动生化分析仪测定，试剂盒由深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司提供，试验严格按照试剂盒的说明书步骤操作。
1.4.2 肝脏、肾脏组织中细胞因子含量及黄嘌呤氧化酶活性测定
肝脏、肾脏组织中的白细胞介素–1β (Interleukin-1β, IL-β)、白细胞介素–6 (Interleukin-6, IL-6)、白细胞介素–8 (Inderleukin-8, IL-8)、肿瘤坏死因子–α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、肿瘤坏死因子–β (Tumor necrosis factor-β, TNF-β)含量和黄嘌呤氧化酶的活性。采用酶联免疫吸附(ELISA)试剂盒，使用MK3型半自动酶联免疫分析仪(Thermo，美国)测定，试剂盒由上海源叶生物科技有限公司提供，试验严格按照试剂盒的说明书步骤操作。以37 ℃条件下，每分钟内催化1 μmol底物转化为产物所需的酶量为1个黄嘌呤氧化酶活力单位(U)。
1.5 数据处理
原始数据用Excel 2010初步整理，采用SPSS 19.0软件进行单因素方差分析和Duncan’s多重比较，试验数据用平均值±标准差表示。
2. 结果与分析
2.1 试验鹅临床症状
试验第7天，C组部分鹅开始出现精神沉郁，食欲不佳和排便较稀的现象。试验第11天，C组鹅开始陆续死亡，剖检可见内脏覆盖了一层白膜，肾脏肿胀，输尿管有尿酸盐沉积等痛风症状。A组和B组鹅正常，没有出现类似C组的临床症状。
2.2 试验鹅生长性能
由表2可知，试验第1天，各组鹅体质量没有差异；试验第7和第14天，C组鹅体质量显著低于A、B组(P<0.05)。试验第1~7天，A组料重比为2.29%，B组为2.83%，C组为3.20%；试验第8~14天，A组料重比为1.79%，B组为2.37%，C组为3.32%。
表 2 不同试验组鹅体重与料重比变化Table 2. Changes in the body weight and feed weight ratio of goose in different experimental group组别
Group体质量/g1) Body weight 料重比/% Feed weight ratio 第1天
1st day第7天
7th day第14天
14th day第1~7天
1st to 7th day第8~14天
8th to 14th dayA 124.00±3.10a 258.57±15.52a 398.46±71.99a 2.29 1.79 B 124.43±3.10a 226.77±28.99a 327.17±53.26a 2.83 2.37 C 124.63±2.62a 181.00±39.88b 270.25±31.64b 3.20 3.32 1) 同列数据后不同小写字母表示差异显著 (P<0.05, Duncan’s法)
1) Different lowercase letters in the same column indicated significant difference (P<0.05, Duncan’s test)2.3 试验鹅血清生化指标测定结果
由表3可知，C组鹅丙氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶活性、尿酸和尿素氮含量显著高于A、B组(P<0.05)。与A组相比，B、C组鹅的总胆红素含量显著降低(P<0.05)。各组间天冬氨酸氨基转移酶和γ−谷氨酰转移酶活性随饲粮中粗蛋白水平的增加而增加，但差异不显著(P>0.05)。各组间碱性磷酸酶活性及白蛋白、球蛋白和总蛋白含量无显著变化(P>0.05)。
表 3 14日龄雏鹅血清生化指标1)Table 3. Serum biochemical indicators of 14-day-old goslings项目 Item 组别 Group A B C 丙氨酸氨基转移酶活性/(U·L–1) Alanine aminotransferase activity 18.80±3.53b 19.69±6.83b 50.72±38.36a 天冬氨酸氨基转移酶活性/(U·L–1) Aspartate aminotransferase activity 15.20±6.38a 23.24±15.71a 25.68±7.95a 碱性磷酸酶活性/(U·L–1) Alkaline phosphatase activity 771.14±276.49a 698.95±331.51a 714.40±326.05a γ−谷氨酰转移酶活性/(U·L–1) γ-glutaminyl transferase activity 2.17±2.75a 2.87±3.75a 4.05±1.14a 乳酸脱氢酶活性/(U·L–1) Lactate dehydrogenase activity 201.04±56.06b 355.66±109.74b 821.59±363.56a ρ(总蛋白) /(g·L–1) Total protein content 36.64±6.92a 35.31±4.93a 32.51±6.62a ρ(白蛋白) /(g·L–1) Albumin content 14.01±1.38a 14.09±1.77a 13.78±1.59a ρ(球蛋白) /(g·L–1) Globulin content 22.61±6.94a 21.21±4.76a 18.73±6.63a c(尿酸) /(μmol·L–1) Uric acid concentration 142.33±23.49b 133.88±57.05b 230.27±82.81a c(总胆红素) /(μmol·L–1) Total bilirubin concentration 12.07±2.21a 8.86±2.33b 4.81±5.10b c(尿素氮) /(mmol·L–1) Urea nitrogen concentration 0.40±0.32b 0.43±0.14b 1.12±0.58a 1) 同行数据后不同小写字母表示差异显著 (P<0.05, Duncan’s法)
1) Different lowercase letters in the same row indicated significant difference (P<0.05, Duncan’s test)2.4 试验鹅肝脏、肾脏HE染色结果
显微镜观察发现，A组鹅的肝脏(图1a)和肾脏(图1e)组织正常；B组鹅的肝脏组织有轻微炎性细胞(图1b)，肾脏组织正常(图1f)；C组鹅的肝脏组织出现水肿(图1c)、坏死和炎性细胞浸润(图1d)，肾脏组织出现肾小球萎缩(图1g)和肾小管空泡变性(图1h)。
![]()
图 1 鹅肝脏和肾脏HE染色后的显微照片a、e分别为A组鹅的肝脏和肾脏组织结构；b、f分别为B组鹅的肝脏和肾脏组织结构；c、d均为C组鹅的肝脏组织结构；g、h均为C组鹅的肾脏组织结构Figure 1. Microscopic pictures of goose liver and kidney after HE staininga and e were liver and kidney tissue structures in geese of group A, respectively; b and f were liver and kidney tissue structures in geese of group B, respectively; c and d were liver tissue structures in geese of group C; g and h were kidney tissue structures in geese of group C2.5 试验鹅肝脏、肾脏组织电镜观察结果
A组鹅的肝脏(图2a)和肾脏(图2d)细胞结构正常，线粒体结构完整，糖原含量丰富。B组鹅的肝脏细胞线粒体开始出现肿胀，糖原含量相对减少(图2b)，肾小管上皮细胞线粒体脊断裂，线粒体出现肿胀(图2e)。C组鹅的肝脏细胞线粒体空泡变性，糖原含量明显减少(图2c)，肾小管上皮细胞线粒体空泡变性，内质网肿胀(图2f)。
![]()
图 2 鹅肝脏、肾脏透射电镜图片a、b和c分别为A、B和C组肝脏细胞结构；d、e和f分别为A、B和C组肾小管上皮细胞结构Figure 2. Transmission electron microscope pictures of goose liver and kidneya, b and c were liver cell structures in group A, B and C, respectively; d, e and f were renal tubular epithelial cell structures in group A, B and C, respectively2.6 试验鹅肝脏、肾脏组织中白细胞因子含量和黄嘌呤氧化酶活性
2.6.1 肝脏组织检测结果
由表4可知，C组肝脏组织中的IL-1β、IL-8含量和黄嘌呤氧化酶活性显著高于A、B组(P<0.05)，随饲粮粗蛋白水平的增加，IL-6、TNF-α和TNF-β的含量呈上升趋势，但组间差异不显著(P>0.05)。
表 4 不同试验组鹅肝脏中炎症因子水平1)Table 4. The inflammatory cytokine level of goose liver in different experimental group项目 Item 组别 Group A B C ρ(IL-1β)/(pg·mL–1) 465.37±45.49b 495.09±39.27b 500.76±32.48a ρ(IL-6)/(pg·mL–1) 290.53±25.85a 295.99±24.67a 343.03±33.73a ρ(IL-8)/(pg·mL–1) 1 168.45±49.59b 1 238.39±145.69b 1 421.43±257.08a ρ(TNF-α)/(pg·mL–1) 1 775.58±113.00a 1 834.83±178.47a 1 842.25±131.31a ρ(TNF-β)/(pg·mL–1) 1 775.58±113.00a 1 834.83±178.47a 1 842.25±131.31a 黄嘌呤氧化酶活性/(U·L–1) Xanthine oxidase activity 40.93±7.33b 49.17±2.80b 51.53±2.96a 1) 同行数据后不同小写字母表示差异显著 (P<0.05, Duncan’s法)
1) Different lowercase letters in the same row indicated significant difference (P<0.05， Duncan’s test)2.6.2 肾脏组织检测结果
由表5可知，C组鹅的肾脏组织中TNF-α含量显著高于A、B组(P<0.05)，各试验组鹅的IL-6和TNF-β含量及黄嘌呤氧化酶活性随饲粮粗蛋白水平的增加而增加，但组间差异不显著(P>0.05)。A、B、C组鹅肾脏组织中IL-1β和IL-8的含量无规律性变化。
表 5 不同试验组鹅肾脏中炎症因子水平1)Table 5. The inflammatory cytokines level of goose kidney in different experimental group项目 Item 组别 Group A B C ρ(IL-1β)/(pg·mL–1) 571.05±24.53a 570.01±60.90a 556.57±31.57a ρ(IL-6)/(pg·mL–1) 290.0±17.10a 316.94±28.01a 328.24±20.40a ρ(IL-8)/(pg·mL–1) 1 086.61±19.21a 1 114.88±56.94a 1 114.64±42.77a ρ(TNF-α)/(pg·mL–1) 1 484.11±68.87b 1 517.44±154.03b 1 703.23±98.99a ρ(TNF-β)/(pg·mL–1) 1 516.36±126.38a 1 537.44±107.06a 1 624.11±107.43a 黄嘌呤氧化酶活性/(U·L–1) Xanthine oxidase activity 52.10±1.97a 52.57±2.39a 53.09±2.65a 1) 同行数据后不同小写字母表示差异显著 (P<0.05, Duncan’s法)
1) Different lowercase letters in the same row indicated significant difference (P<0.05, Duncan’s test)3. 讨论与结论
3.1 生长性能
本研究各试验组间鹅的采食量差别不大，但随着饲粮中粗蛋白水平的增加，鹅的体质量反而减小。我国各地区鹅的饲养标准不统一[9]，本试验得出粗蛋白质质量分数为16%的饲粮更适合雏鹅的生长发育，粗蛋白质含量过高不但不能促进雏鹅快速生长，反而会降低其生长性能。
3.2 饲粮粗蛋白水平对鹅血清生化指标的影响
在动物体内，丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶等主要存在于肝脏细胞的线粒体内，在外周血液中的活性很低，当自由基破坏肝脏细胞膜的组成成分脂质时，脂质发生过氧化，细胞膜的完整性就会遭到破坏，大量丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶流入血液中，造成外周血中丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶活性明显增高。丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶和乳酸脱氢酶活性是反映肝细胞受损程度比较灵敏的检测指标[10-11]，C组鹅丙氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶和谷氨酰转移酶活性高于A、B组，说明C组鹅肝功能开始出现异常。尿酸和尿素氮含量是反映肾功能的重要指标，当肾脏受损时，这些指标将发生变化，C组鹅尿酸和尿素氮含量显著高于A、B组，说明C组鹅的肾脏开始出现一定程度的损伤。这可能是由于C组鹅摄取过多的蛋白质，加重肝脏与肾脏的代谢负担，导致肝、肾代谢出现障碍和肝脏与肾脏组织损伤。
3.3 饲粮粗蛋白水平对鹅肝脏、肾脏组织的影响
禽类缺乏精氨酸酶，不能像家畜那样把蛋白质代谢产生的氨通过鸟氨酸循环转变为尿素随尿液排出，而只能在体内合成嘌呤(主要在肝脏内合成)，然后再转变为尿酸经过肾脏从尿液中排出[12]。在体内代谢过程中过量的蛋白质会产生大量尿酸盐，当尿酸含量超过肾脏能够排出的最大限度时，会导致肾功能衰退[13]。本试验C组鹅的肝脏细胞出现炎性浸润、水肿，细胞结构发生变化，肾脏出现肾小管空泡变性和肾小球萎缩，说明肝脏和肾脏已经出现病变，A组鹅的肝脏、肾脏组织完整，B组鹅的肝脏细胞有轻微的炎性浸润，可见雏鹅饲粮中粗蛋白质质量分数不宜超过20%。
3.4 饲粮粗蛋白水平对鹅肝脏、肾脏组织中细胞因子水平和黄嘌呤氧化酶活性的影响
IL-1β参与全身或局部炎症的急性发作，也参与心肌梗塞或中风，痛风患者体内IL-1β含量会显著升高[14]；IL-6是一种多功能的细胞因子，其调节免疫应答、造血、急性期反应和炎症等反应[15]；IL-8也是一种公知的循环炎性细胞因子[16]，巨噬细胞、上皮细胞，气管平滑肌细胞和内皮细胞等产生IL-8；黄嘌呤氧化酶是尿酸生成过程中一种重要的酶，当血清中尿酸含量增加时，黄嘌呤氧化酶活性也相应增加[17]；TNF-α、TNF-β也是参与炎症反应的细胞因子[18]。本研究发现，C组鹅肝脏组织中的IL-1β和IL-8含量及黄嘌呤氧化酶活性显著高于A、B组，随着粗蛋白水平的增加，TNF-α、TNF-β、IL-6的含量呈上升趋势。C组肾脏中TNF-α含量显著高于A、B组，IL-6和TNF-β含量及黄嘌呤氧化酶活性随粗蛋白水平的增加而增加，A组和B组肾脏中IL-1β和IL-8的含量基本相同，均显著低于C组。试验进一步证明饲粮中粗蛋白质质量分数为24%时，肝脏、肾脏内出现炎症反应。与A组相比，C组鹅的黄嘌呤氧化酶活性显著升高，此时血清尿酸水平也显著升高，这可能是高蛋白质饲粮引发鹅痛风的关键性因素。
3.5 结论
饲粮中粗蛋白质质量分数为16%时，雏鹅生长性能较好，各项生化指标正常；饲粮中粗蛋白质质量分数为24%时，雏鹅血清尿酸等生化指标发生明显变化，开始出现痛风症状，生长性能下降，鹅肝、肾组织出现炎症反应，功能出现异常。
-
![]()
图 1 栝楼果实腐烂病田间发病症状
Figure 1. Sympthoms of fruit rot on Trichosanthes kirilowii in the field
![]()
图 3 4种不同类型菌株对栝楼果实的致病性
A~D分别接种菌株HP017、QSC2、HP002、SSA9；E：对照
Figure 3. Pathogenicity of four different isolates on the fruit of Trichosanthes kirilowii
A−D: Inoculated with HP017, QSC2, HP002, SSA9, respectively; E: Control
![]()
图 4 基于TEF-1α基因序列对镰孢菌属菌株构建的系统发育树
分支位置中的数字表示自举值；标尺表示每个核苷酸位点上的0.02替换值
Figure 4. Phylogenetic tree of the strains of Fusarium spp. based on TEF-1α gene sequences
The numbers in each branch points denote the percentages supported by bootstrap; The scale bar represents 0.02 substitutions per nucleotide position
![]()
图 5 基于4个位点序列对辽宁刺盘孢及其近缘种构建的系统发育树
“*”为模式菌株；节点上的数字为50%以上的自举值
Figure 5. Phylogenetic tree of the strains of Colletotrichum liaoningense and related species based on the concatenated sequences of four loci
“*” represent type strain; Bootstrap support values above 50% are shown at the nodes
![]()
图 6 基于6个位点序列对果生刺盘孢及其近缘种构建的系统发育树
“*”为模式菌株；节点上的数字为50%以上的自举值
Figure 6. Phylogenetic tree of the strains of Colletotrichum fructicola and related species based on the concatenated sequences of six loci
“*” represents type strain; Bootstrap support values above 50% are shown at the nodes
表 1 菌株信息及目的基因序列
Table 1 Strain information and target gene sequences
物种 Species 菌株 Strain GenBank登录号 GenBank accession number ITS ACT CAL CHS-1 GAPDH TUB2 TEF-1α Fusarium fujikuroi HP016 MW357640 HP017 MW357641 Fusarium proliferatum QSC2 MW357642 Colletotrichum fructicola DMC2 MW349792 MW357613 MW357616 MW357619 MW357622 MW357625 HP009 MW349793 MW357614 MW357617 MW357620 MW357623 MW357626 HP002 MW349794 MW357615 MW357618 MW357621 MW357624 MW357627 Colletotrichum liaoningense DMC1 MW349983 MW357628 MW357632 MW357636 QSA6 MW349984 MW357629 MW357633 MW357637 SSA9 MW349985 MW357630 MW357634 MW357638 HKC10 MW349986 MW357631 MW357635 MW357639 
下载: 导出CSV
表 2 7种杀菌剂对镰孢病菌和炭疽病菌的室内毒力测定
Table 2 Determination of the virulence of seven fungicides to Fusarium spp. and Collrtotrichum spp.
菌株 Strain 药剂 Fungicide w(有效成分)/% Active ingredient content 毒力回归方程 Virulence regression equation 相关系数 Correlation coefficient EC50/ (μg·mL−1) F. fujikuroi HP017 春雷霉素 Kasugamycin 70 y=3.5923+0.8234x 0.9518 51.2516 咪鲜胺 Prochloraz 98 y=6.0341+1.2900x 0.9985 0.1579 咯菌腈 Fludioxonil 95 y=5.3824+0.5183x 0.8821 0.1829 嘧菌酯 Azoxystrobin 95 y=4.1359+0.4202x 0.9695 113.8843 苯醚甲环唑 difenoconazole 95 y=5.2198+0.6339x 0.9788 0.4500 氰烯菌酯 Phenamacril 95 y=5.4272+0.8213x 0.9223 0.3019 百菌清 Chlorothalonil 99 y=4.4958+0.9701x 0.9701 5.1781 F. proliferatum QSC2 春雷霉素 Kasugamycin 70 y=3.2031+0.9861x 0.8280 66.3944 咪鲜胺 Prochloraz 98 y=5.7667+0.8081x 0.9814 0.1125 咯菌腈 Fludioxonil 95 y=5.1877+0.4394x 0.9718 0.3740 嘧菌酯 Azoxystrobin 95 y=4.0472+0.4645x 0.9547 112.4802 苯醚甲环唑 Difenoconazole 95 y=5.4574+0.4666x 0.9914 0.1046 氰烯菌酯 Phenamacril 95 y=5.2917+0.8950x 0.8174 0.4721 百菌清 Chlorothalonil 99 y=4.7491+0.4570x 0.9933 3.5409 C. fructicola HP002 春雷霉素 Kasugamycin 70 y=3.6179+0.9751x 0.9507 26.1436 咪鲜胺 Prochloraz 98 y=6.1584+1.2283x 0.9815 0.1140 咯菌腈 Fludioxonil 95 y=4.8670+0.4045x 0.9151 2.1325 嘧菌酯 Azoxystrobin 95 苯醚甲环唑 Difenoconazole 95 y=5.4561+0.9250x 0.9937 0.3213 氰烯菌酯 Phenamacril 95 y=1.3563+2.9354x 0.9472 17.4313 百菌清 Chlorothalonil 99 y=3.5858+0.7712x 0.9917 68.2058 C. liaoningense SSA9 春雷霉素 Kasugamycin 70 y=3.1409+1.4118x 0.9916 20.7440 咪鲜胺 Prochloraz 98 y=6.2287+1.1271x 0.9966 0.0813 咯菌腈 Fludioxonil 95 y=5.4883+0.2428x 0.8546 0.0097 嘧菌酯 Azoxystrobin 95 y=5.1603+0.2492x 0.9395 0.2274 苯醚甲环唑 Difenoconazole 95 y=5.1997+0.9780x 0.9563 0.6249 氰烯菌酯 Phenamacril 95 y=0.6025+2.8622x 0.9879 34.3876 百菌清 Chlorothalonil 99 y=3.4277+0.7099x 0.9859 164.0227
下载: 导出CSV
-
[1] 徐劲峰, 檀根甲, 韩翔. 栝楼炭疽病发生危害及综合控制技术研究[J]. 安徽农业科学, 2006(15): 3741-3784. doi: 10.3969/j.issn.0517-6611.2006.15.086 [2] 孙凯, 陈夕军, 沈迎春, 等. 江苏省栝楼烂果病病原鉴定及室内防治药剂筛选[J]. 江苏农业科学, 2020, 48(24): 112-116. doi: 10.15889/j.issn.1002-1302.2020.24.021 [3] 吴朝晖. 安庆市栝楼产业现状及发展对策[J]. 安徽林业科技, 2020, 46(3): 56-58. doi: 10.3969/j.issn.2095-0152.2020.03.017 [4] 韩翔. 瓜蒌炭疽菌的生理生态及病害防治的研究[D]. 合肥: 安徽农业大学, 2004. [5] LI H Y, ZHANG Z F. First report of Colletotrichum gloeosporioides causing anthracnose fruit rot of Trichosanthes kirilowii in China[J]. Plant Disease, 2007, 91(5): 636-636.
[6] ZHANG L X, SONG J H, TAN G J, et al. Characterization of Colletotrichum gloeosporioides responsible for anthracnose disease of Trichosanthes kirilowii Maxim in central China[J]. Phytoparasitica, 2014, 42(4): 549-558. doi: 10.1007/s12600-014-0393-6
[7] ZHAO W, LI W, CHI Y, et al. Occurrence of stem blight and fruit rot caused by Phytophthora capsici on Chinese cucumber (Trichosanthes kirilowii) in China[J]. Plant Disease, 2020, 105(1): 232.
[8] 方中达. 植病研究方法[M]. 北京: 中国农业出版社, 1998: 122-142. [9] 张素轩. 镰刀菌属分类进展[J]. 真菌学报, 1991, 10(2): 85-94. [10] 刘晓云, 景耀, 杨俊秀. 植物炭疽菌研究文献综述[J]. 西北林学院学报, 1995(4): 105-111. [11] 刘小勇, 田素忠, 秦国夫, 等. 提取植物和微生物DNA的SDS-CTAB改进法[J]. 北京林业大学学报, 1997, 19(3): 100-103. doi: 10.3321/j.issn:1000-1522.1997.03.018 [12] SCHAAFAMA A W, LIMAY-RIOS V, TAMBURIC-ILLINCIC L. Mycotoxins and Fusarium species associated with maize ear rot in Ontario, Canada[J]. Cereal Research Communications, 2008, 36: 525-527.
[13] O'DONNELL K, CIGELNIK E. Two divergent intragenomic rDNA ITS2 types within a monophyletic lineage of the fungus Fusarium are nonorthologous[J]. Molecular Phylogenetics and Evolution, 1997, 7(1): 103-116. doi: 10.1006/mpev.1996.0376
[14] WEIR B S, JOHNSTON P R, DAMM U. The Colletotrichum gloeosporioides species complex[J]. Studies in Mycology, 2012, 73(1): 115-180.
[15] BERBEE M L, PIRSEYEDI M, HUBBARD S. Cochliobolus phylogenetics and the origin of known, highly virulent pathogens, inferred from ITS and glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene sequences[J]. Mycologia, 1999, 91(6): 964-977. doi: 10.1080/00275514.1999.12061106
[16] CARBONE I, KOHN L M. A method for designing primer sets for speciation studies in filamentous ascomycetes[J]. Mycologia, 1999, 91(3): 553-556. doi: 10.1080/00275514.1999.12061051
[17] LIU F, CAI L, CROUS P W, et al. The Colletotrichum gigasporum species complex[J]. Persoonia, 2014, 33(1): 83-97. doi: 10.3767/003158514X684447
[18] WHITE T J, BRUNS T D, LEE S B, et al. Amplification and direct sequencing of fungal ribosomal RNA genes for phylogenetics[M]//INNIS M A, GELFAND D H, SAIMKY J J, et al. PCR Protocols: A guide to methods and applications. New York: Academic Press, 1990: 315-322.
[19] 陈宏州, 杨红福, 姚克兵, 等. 水稻恶苗病病原菌鉴定及室内药剂毒力测定[J]. 植物保护学报, 2018, 45(6): 1356-1366. doi: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2018.2018019 [20] 王晓莉, 李哲, 叶文武, 等. 江苏省13个地区水稻种子携带4种不同恶苗病菌的LAMP检测[J]. 南京农业大学学报, 2020, 43(5): 846-852. doi: 10.7685/jnau.201912029 [21] 王昌亮, 武海燕, 张猛. 河南省一例西瓜果实腐烂病病原鉴定[J]. 植物病理学报, 2011, 41(5): 542-545. doi: 10.13926/j.cnki.apps.2011.05.012 [22] HE L F, LI X X, GAO Y Y, et al. Characterization and fungicide sensitivity of Colletotrichum spp. from different hosts in Shandong, China[J]. Plant Disease, 2019, 103(1): 34-43. doi: 10.1094/PDIS-04-18-0597-RE
[23] 雷娅红, 况卫刚, 郑春生, 等. 基于DNA条形码技术对镰刀菌属的检测鉴定[J]. 植物保护学报, 2016, 43(4): 544-551. doi: 10.13802/j.cnki.zwbhxb.2016.04.003 [24] 刘威, 叶乃兴, 刘伟, 等. 茶树炭疽菌的鉴定及致病力分析[J]. 福建农林大学学报(自然科学版), 2015, 44(6): 581-586. doi: 10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2015.06.004 [25] 杨媚, 冯淑杰, 何银银, 等. 柑橘炭疽病高效杀菌剂的筛选及抗药性菌株的发现[J]. 华南农业大学学报, 2013, 34(1): 28-31. doi: 10.7671/j.issn.1001-411X.2013.01.006 [26] 赵金梅, 高贵田, 谷留杰, 等. 中华猕猴桃褐斑病病原鉴定及抑菌药剂筛选[J]. 中国农业科学, 2013, 46(23): 4916-4925. doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.23.007 [27] 徐建强, 平忠良, 马世闯, 等. 河南省小麦赤霉病菌对咯菌腈的敏感性[J]. 植物保护学报, 2018, 45(6): 1367-1373. [28] 霍建飞, 姚玉荣, 郝永娟, 等. 天津市宁河区辣椒炭疽病病原鉴定及防治药剂筛选[J]. 北方园艺, 2020(3): 1-7. [29] PATEL J S, GUDMESTAD N C, MEINHARDT S, et al. Pyraclostrobin sensitivity of baseline and fungicide exposed isolates of Pyrenophora tritici-repentis[J]. Crop Protection, 2012, 34: 37-41. doi: 10.1016/j.cropro.2011.10.015
-
期刊类型引用(17)
1. 张鑫，张康，史文龙，程露，胡倩倩，李小金，靳蒙蒙，任曼，李升和. 平衡赖氨酸和蛋氨酸的低蛋白日粮对育雏期皖西白鹅血液生化和胸腺结构的影响. 安徽科技学院学报. 2024(02): 1-12 . 
百度学术
2. 贺林娇，李倩，海妮·金格斯，黄新新，李佳豪，经宏鑫，李超，马超宇，蔺建薇，王卓，李晓斌. 补喂鞣花酸对泌乳期母马血液生化指标的影响. 中国乳品工业. 2024(05): 21-25 . 百度学术
3. 朱道仙，吴植，郝福星，刘静，卢劲晔. 基于网络药理学、分子对接及动物试验研究虎杖防治雏鹅痛风的作用机制. 黑龙江畜牧兽医. 2024(13): 91-97+113-114 . 百度学术
4. 朱道仙，刘莉，王璟琨，郝福星，吴植，卢劲晔. MCC950通过抑制核苷酸结合寡聚化结构域样受体3炎症小体改善高蛋白质饮食雏鹅生长性能、尿酸代谢和肾脏损伤. 动物营养学报. 2023(01): 277-286 . 百度学术
5. 张彤，覃姝瑜，周立红，何瑞婷. 基于网络药理学研究楤木多糖影响痛风的分子机制. 壮瑶药研究. 2023(03): 235-238 . 百度学术
6. 杨征烽，陈媛婧，杨海明，韩厚明，宿国强，朱沛霁，王志跃. 饲粮不同来源及水平蛋白质对仔鹅生长性能、血清生化指标和氮代谢的影响. 动物营养学报. 2022(05): 2991-2999 . 百度学术
7. 刘馨忆，孙兴忠. 高蛋白质日粮对肉鸡生长性能和肾脏组织及相关血液指标的影响. 中国饲料. 2022(08): 66-69 . 百度学术
8. 朱道仙，吴植，陆江，黄涛，刘莉. 痛风雏鹅肠道菌群通过TLR4/MyD88/NF-κB通路促进肾损伤的研究. 畜牧兽医学报. 2021(02): 543-552 . 百度学术
9. 赵杰，徐静茹，曹利，朱雷，刘明达，冯士彬，李玉，李锦春，吴金节，王希春. 高蛋白饲粮对肉鸡肾氧化损伤及黄嘌呤氧化酶基因mRNA表达量的影响. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2021(02): 1-7 . 百度学术
10. 王志，胡仲皓，桂雪儿，冯士彬，李玉，王希春，李锦春，吴金节. 饲喂高蛋白日粮对雏鹅血清尿酸水平、肝脏和肾脏超微结构及ABCG2表达的影响. 浙江农业学报. 2021(05): 801-808 . 百度学术
11. 董飚，顾文婕，王健，李小芬，张玲. 日粮蛋白水平对鹅生产性能及GH基因表达的影响. 畜牧与兽医. 2021(07): 20-24 . 百度学术
12. 王志，胡仲皓，桂雪儿，冯士彬，李玉，王希春，李锦春，吴金节. 高蛋白日粮对雏鹅生长性能、血清炎症因子及XDH表达的影响. 西北农林科技大学学报(自然科学版). 2021(08): 25-32 . 百度学术
13. 朱道仙，陆江，刘莉，吴植. 丁酸钠对高蛋白饲料诱导雏鹅痛风及肠道尿酸转运体蛋白表达的影响. 家畜生态学报. 2021(12): 60-66 . 百度学术
14. 许大双. 雏鹅痛风病的诊治. 现代农业科技. 2020(08): 231-232 . 百度学术
15. 王志，胡仲皓，贺濛初，桂雪儿，朱杰，冯士彬，李锦春，吴金节. 高钙高蛋白日粮对肉仔鸡生长性能、血清生理生化指标和盲肠菌群的影响. 江西农业大学学报. 2020(04): 718-727 . 百度学术
16. 张吉昌. 鹅在不同营养水平下的生产性能. 养殖与饲料. 2020(09): 43-44 . 百度学术
17. 黄远丕，黄运茂，闫俊书，奚雨萌. 饲粮因素诱发雏鹅痛风的机制剖析及营养调控技术. 动物营养学报. 2020(09): 4029-4036 . 百度学术
其他类型引用(8)
计量
- 文章访问数: 183
- HTML全文浏览量: 1
- PDF下载量: 301
- 被引次数: 25
