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FSTL1基因促进猪前体脂肪细胞分化成脂的机制

徐谷莉, 黎镜聪, 顾婷, 蒋方毅, 王翀

徐谷莉, 黎镜聪, 顾婷, 等. FSTL1基因促进猪前体脂肪细胞分化成脂的机制[J]. 华南农业大学学报, 2020, 41(1): 54-60. DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201903042
引用本文: 徐谷莉, 黎镜聪, 顾婷, 等. FSTL1基因促进猪前体脂肪细胞分化成脂的机制[J]. 华南农业大学学报, 2020, 41(1): 54-60. DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201903042
XU Guli, LI Jingcong, GU Ting, et al. Mechanism of FSTL1 gene promoting porcine preadipocyte differentiation and lipogenesis[J]. Journal of South China Agricultural University, 2020, 41(1): 54-60. DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201903042
Citation: XU Guli, LI Jingcong, GU Ting, et al. Mechanism of FSTL1 gene promoting porcine preadipocyte differentiation and lipogenesis[J]. Journal of South China Agricultural University, 2020, 41(1): 54-60. DOI: 10.7671/j.issn.1001-411X.201903042

FSTL1基因促进猪前体脂肪细胞分化成脂的机制

基金项目: 广东省教育厅基础研究重大项目及应用研究重大项目(2017KZDXM009);现代农业产业共性技术创新团队项目(2018LM2150)
详细信息
    作者简介:

    徐谷莉(1992—),女,硕士研究生,E-mail: 2386205622@qq.com

    通讯作者:

    王 翀(1968—),女,教授,博士,E-mail: betty@scau.edu.cn

  • 中图分类号: S813.1

Mechanism of FSTL1 gene promoting porcine preadipocyte differentiation and lipogenesis

  • 摘要:
    目的 

    构建猪FSTL1基因过表达载体和RNAi载体,探究FSTL1基因对猪前体脂肪细胞分化成脂的作用及机制。

    方法 

    通过构建FSTL1基因过表达载体和RNAi载体,在猪前体脂肪细胞中过表达、干扰FSTL1基因并诱导其分化,测定细胞中甘油三酯含量以及脂肪细胞分化相关调节基因的mRNA表达量。

    结果 

    成功克隆得到猪FSTL1基因cDNA序列,其开放阅读框全长924 bp,并将序列提交到GenBank,登录号为KF021281。成功构建猪FSTL1基因的过表达载体pcDNA3.1-FSTL1和RNAi载体pSilencer 4.1-491以及pSilencer 4.1-530。过表达FSTL1基因促进了猪前体脂肪细胞中甘油三酯生成,干扰FSTL1基因抑制了猪前体脂肪细胞中甘油三酯的生成。FSTL1在猪前体脂肪细胞中使PPARγ2AP2基因表达分别上调了73%和113%,使LPLAdiponectinFASN等基因表达分别下调了44%、79%和16%。

    结论 

    FSTL1基因通过上调PPARγ2AP2基因,下调LPLAdiponectinFASN基因的表达,促进猪前体脂肪细胞的分化,提高猪前体脂肪细胞中甘油三酯的含量。

    Abstract:
    Objective 

    To construct the overexpression vector and RNAi vector for porcine FSTL1 gene, and investigate the role and mechanism of FSTL1 gene on the differentiation of porcine preadipocytes.

    Method 

    We constructed the overexpression vector and RNAi vectors of FSTL1 gene, transfected the vectors into porcine preadipocytes, and then induced differentiation of preadipocytes. Triglyceride content and the mRNA expression levels of adipocyte differentiation-associated genes were measured.

    Result 

    The cDNA sequence of porcine FSTL1 gene was successfully cloned, the length of open reading frame was 924 bp, and the sequence has been submitted to GenBank with the login ID of KF021281. The overexpression vector pcDNA3.1-FSTL1 and the RNAi vectors pSilencer 4.1-491 and pSilencer 4.1-530 of the porcine FSTL1 gene were successfully constructed. Overexpressed FSTL1 gene promoted triglyceride content in porcine preadipocytes, whereas triglyceride content was reduced after FSTL1 gene was interfered. FSTL1 up-regulated the mRNA expression level of PPARγ2, AP2 genes by 73% and 113% respectively, and down-regulated LPL, Adiponectin and FASN genes by 44%, 79%, and 16% respectively.

    Conclusion 

    The FSTL1 gene promotes the differentiation of porcine preadipocytes through up-regulating the mRNA expression of PPARγ2 and AP2 genes and down-regulating LPL, Adiponectin and FASN genes, and increases triglyceride content in porcine preadipocytes.

  • 随着经济发展与人民生活水平的提高,鸡肉已成为我国仅次于猪肉的第二大肉类消费品[1]。近年来,规模化立体笼养已成为肉鸡饲养模式发展的必然趋势。但在规模化、集约化养殖条件下,饲养密度大,饲养管理如不到位极易造成肉鸡疫病大面积流行,从而给养殖场造成较大的经济损失[2]。体温是衡量肉鸡健康与否的重要指标之一[3-5]。通过实时监测肉鸡体温可以反映其因病理或应激响应带来的健康问题,从而使养殖人员及时进行疾病防治。如何及时、快速、精准地感知鸡群体温状况,降低饲养人员劳动强度,提高饲养管理自动化、智能化水平,对于我国肉鸡养殖业健康发展具有重要意义。

    传统肉鸡体温测量方法多为人工接触式测量,使用汞温度计或电子体温计测量直肠温度,费时费力且极易造成鸡只感染和笼内恐慌,显然已不适用于当前的大规模养殖环境。有学者基于温度传感器与无线通信技术建立了家禽实时体温检测系统[6-8]。但此种测温方法仍为接触式测量,存在测温装置易脱落、设备易受潮失灵、易造成畜禽疾病感染等弊端,不符合福利养殖要求。

    近年来,红外热成像技术凭借无应激、无损伤的优势,在畜禽体温测量及疾病检测应用方面正逐步取代传统测温方法[9-11]。目前,针对猪、牛等大体型、少体毛家畜,将热红外技术与图像处理技术相结合,较容易实现感兴趣区域(Region of interest,ROI)提取与识别,以完成非接触式温度测量或动物行为分析[12-15]

    在家禽热成像体温检测方面,因家禽具有体型小、羽毛厚、养殖密度大等特点,目前研究难点主要有:1)规模化商业养殖环境下红外热像上的特征区域识别较困难;2)鸡只红外体表温度是否可精准代表其体内温度等问题。陆辉山等[16]和李沛等[17]采用红外热成像技术与回归分析方法,对蛋鸡体表温度与翼下温度之间的关系进行研究,建立了体温预测模型,结果表明蛋鸡体表无羽区域红外热像可用于其翅下体温预测,从而反映鸡只体温情况。沈明霞等[18]通过深度学习提取红外热像ROI温度,结合环境温度、湿度,利用回归算法得出了肉鸡翼下温度反演模型,达到肉鸡体温检测的目的,但是该研究采用无遮挡的单只鸡站立侧面图像来提取头部和腿部特征区域,与商业养殖场肉鸡笼养模式相比显然较理想化。实际生产中随周龄增大肉鸡姿态多为卧姿,腿部信息难以获取,且鸡只经常拥挤在一起并易受到笼子、饮水线等物遮挡,从而造成特征区域提取困难。Bloch等[19]采用低成本红外相机与Lasso回归预测模型,设计了一个针对商业肉鸡场个体肉鸡的红外体温检测系统,试验结果表明,该系统有可能代替环境温度传感器有效应用于鸡舍环境控制。然而该项研究针对的是地面散养肉鸡,测温系统安装于喂食器处,只有当某只鸡采食时,才获取该鸡的体温数据,不适用于规模化笼养肉鸡的鸡群整体体温与健康实时监测。

    本文针对商业笼养肉鸡养殖环境,利用红外热成像技术获取笼养肉鸡图像,基于YOLOv5s提取鸡头特征区域温度,分别采用线性回归与非线性回归2种方法建立翅下体温预测模型,为舍内笼养肉鸡健康自动巡检设备建造奠定前期研究基础,从而促进禽畜养殖产业自动化、智能化发展。

    试验数据采集地点为河北省保定市玖兴肉鸡养殖场,试验对象为5周龄‘罗斯308’白羽肉鸡。试验选用FLIRE60型红外热像仪、汞温度计和GSP-8电子温湿度计等设备。数据采集所选白羽肉鸡平均体质量为2 kg,采集时间为08:00—17:00,每间隔1 h进行1次数据采集。将白羽肉鸡放在鸡舍中随机选取的某个上层鸡笼内,选取上层鸡笼的目的是便于数据采集,鸡笼长102 cm,宽73 cm,高40 cm。测温前将红外热像仪放置于笼前40 cm处,为了获得精准的温度数据,对红外热像仪进行标定,设置热像仪的镜头参数和发射率参数,待鸡只稳定后,利用热成像仪连续拍摄3次红外图像,用于提取体表特征区域温度;拍摄结束后,将汞温度计贴近肉鸡翅下等待5 min后取出并读取温度,重复测取3次温度数据,取平均值记录。在每只鸡数据采集完成之后,读取温湿度计记录此时鸡舍的温度和湿度。数据采集示意图如图1所示。

    图  1  笼养肉鸡数据采集示意图
    1:红外热像仪;2:三脚架;3:下层鸡笼;4:上层鸡笼;5:饮水装置;6:饲料槽
    Figure  1.  Schematic diagram of data collection for caged broilers
    1: Infrared thermal imaging instrument; 2: Tripod; 3: Lower layer chicken cage; 4: Upper layer chicken cage; 5: Drinking water plant; 6: Feed trough

    在红外图像中不同温度的物体呈现不同的颜色,笼内肉鸡红外图像如图2所示,A、B、C 3个区域分别为鸡只头部、胸部及腿部,与鸡只身体其他部分颜色相比,此3处区域颜色明显较为明亮,可考虑选取此3处作为体表特征区域进行下一步研究。因肉鸡胸部有羽毛遮挡,且不同鸡只的羽毛覆盖率不同,导致温度提取时差异较大。且陆辉山等[16]发现鸡只羽毛覆盖区的体表温度受环境温度影响巨大,对衡量鸡只的真实体温没有实际价值,所以不选用鸡胸作为ROI研究。由图2中可看出,鸡只腿部并不容易被红外相机所捕获,所以最终选取鸡只头部作为试验的特征区域,即ROI,并取特征区域中最高温度和平均温度作为ROI温度展开研究。

    图  2  笼养肉鸡红外图像
    A:头部;B:胸部;C:腿部
    Figure  2.  Infrared image of a caged broiler
    A: Head; B: Breast; C: Leg

    由于鸡舍环境复杂,拍摄的笼内肉鸡红外图像不容易通过简单的图像处理方法得到ROI,故而通过使用深度学习来提取ROI。YOLOv5凭借着优秀的检测性能被广泛应用于目标检测领域[20-22],根据不同的深度与宽度,YOLOv5又分为YOLOv5s、YOLOv5m、YOLOv5l、YOLOv5x这4种不同的版本模型。由于YOLOv5s模型具有更快的检测速度和更小的模型体积,故本文选用YOLOv5s进行ROI提取试验研究。根据模型输出结果,获取ROI矩形框的4个顶点坐标,通过坐标信息从存有图像温度数据的CSV文件提取温度的最大值与平均值,达到ROI温度提取的目的。

    YOLOv5s由输入端、主干网络、颈部网络和输出端4个部分组成,其网络结构如图3所示。在整个目标检测网络中,输入端主要通过Mosaic数据增强、自适应锚框计算和自适应图片缩放3种方式对输入图片进行预处理。

    图  3  YOLOv5网络结构图
    Figure  3.  Structural diagram of YOLOv5 network

    主干网络为特征提取网络,主要包括Focus结构、跨阶段局部网络(Cross stage paritial,CSP)结构、卷积模块(Conv+BN+Leaky_relu,CBL)和空间金字塔池化模块(Spatial pyramid pooling module,SSP)。Focus结构对图片进行切片,经过一系列操作得到4张图片,而后将图片拼接起来,这样相对于原先的RGB三通道模式变成了12个通道,再经过1次卷积操作,使得特征提取更加充分。CSP结构分为CSP1和CSP2,CSP1是特征提取部分,用于增强网络的学习能力,减少计算量和网络参数,保证较高的准确率。

    颈部网络为特征融合网络,其采用FPN+PAN网络结构。利用自上而下与自下而上联合的特征双向融合方式,可以更好地对主干网络和检测网络提取的特征信息进行融合,然后将特征信息传入到预测层,加强网络特征融合的能力。颈部网络中采用CSP2结构,在降低计算量的同时,使得网络对特征的融合能力得到加强,保留了更丰富的特征信息。

    YOLOv5s的输出端,采用GIOU_Loss作为Bounding box的损失函数。同时针对较多目标框的筛选,采用GIOU_nms非极大值抑制的方式筛选目标位置的边框坐标。

    共采集图像4865幅,将训练所需图像通过Labelimg软件进行标注,获取对应的xml文件。xml文件内容包括图片的存储路径、文件名、标注类别、所标注位置对角坐标等信息。

    用于深度学习模型搭建与训练的硬件平台为CPU:Intel(R) Core(TM) i7-10700 CPU @ 2.90 GHz,GPU:GeForce RDTX 3070、8.0 GB独立显存和16.0 GB内存。软件环境为Windows 10、Cuda11.5、采用Pytorch深度学习框架,在Python3.7环境下对模型进行训练。训练参数Epoch为300,Batch_Size值为16;优化器为Adam,初始学习率为0.01,冲量为0.937,权重衰减(Weight decay)为0.0005。

    由采集数据可知,1天内肉鸡翅下温度基本保持恒定,但体表温度随环境变化而发生改变。本试验共采集翅下温度、鸡头最高温度、鸡头平均温度、环境温度、环境湿度5类数据。为分析各类数据之间的相关性,采用Excel进行多元线性回归分析,采用SPSS进行多元非线性回归分析,对60组数据进行模型拟合及拟合结果测试,得出翅下温度与其他变量之间的函数关系,并应用决定系数($ {R}^{2} $)及误差检验其拟合效果。

    采用精准率($ {{P}} $r)、召回率($ {{R}} $)、F1值和每秒传输帧数(FPS)这4项指标来评价基于YOLOv5s训练的ROI模型的性能,具体计算公式如下:

    $${{ P_{\rm{r}}}} = \dfrac{{{\rm{TP}}}}{{{\rm{TP}} + {\rm{FP}}}} ,$$ (1)
    $$ \begin{split}&\;\\ & R = \dfrac{{{\rm{TP}}}}{{{\rm{TP}} + {\rm{FN}}}}, \end{split}$$ (2)
    $$ F1 = \dfrac{{2P_{\rm{r}} R}}{{P_{\rm{r}} + R}}, $$ (3)

    式中,$ {\rm{TP}} $表示正确检测到的肉鸡鸡头,$ {\rm{FP}} $表示错误检测到的肉鸡鸡头,$ {\rm{FN}} $表示未被正确检测到的肉鸡鸡头,F1值为精准率和召回率的调和平均数。FPS表示模型每秒可以处理的图像数量,FPS越高,检测速度越快。

    将60张待测试红外图像输入到训练后的YOLOv5s、YOLOv5m、YOLOv5l和YOLOv5x模型中进行检测并记录结果。计算各算法模型对笼内肉鸡红外图像识别结果的精准率Pr、召回率RF1值和FPS,各算法模型测试结果对比如表1所示。在本试验中,设置的检测阈值(IOU)为0.5,当模型预测的目标边界与测试集对应的标注数据中的边界框的IOU大于或等于设定阈值时,则认为检测结果正确,否则视为检测错误。通过分析4种不同算法模型的测试结果,可以看出YOLOv5s算法模型在保证检测精度的同时,FPS达到65,综合对比检测精度和检测速度,YOLOv5s算法模型具有更好的综合检测性能。最终经过测试统计,YOLOv5s模型对ROI识别精准率为93.8%,召回率为95.8%。

    表  1  各算法模型测试结果对比
    Table  1.  Comparison of test results of different algorithm models
    模型
    Model
    精准率/%
    Precision
    (Pr)
    召回率/%
    Recall
    (R)
    F1每秒传输帧数
    Frame per
    second (FPS)
    YOLOv5s 93.8 95.8 94.8 65
    YOLOv5m 93.8 96.2 95.2 58
    YOLOv5l 91.8 89.1 90.4 53
    YOLOv5x 93.5 90.6 92.0 50
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    图4为YOLOv5s模型对测试图像的检测结果。图4a中3只鸡的ROI均被正确识别;图4b中共检测出2个ROI,但其中1个ROI为模型将鸡只胸部误识别为头部;图4c中共有2个ROI,但模型仅识别出1个ROI,另外1个没有被识别。原因可能在于误识别区域特征与头部特征类似、模型没有完全学习到未识别区域特征。为减少误识别和识别遗漏情况的发生,后续可增加训练集数量,使模型更加充分地学习到ROI特征。

    图  4  模型对测试图像的检测结果
    Figure  4.  Detection results of the model on the test image

    本文选用多元线性回归和多元非线性回归2种方法建立反演模型,并对模型结果进行对比分析。不同时刻肉鸡翅下温度和特征区域温度及环境温、湿度试验数据如表2所示。其中翅下温度由温度计测得,鸡头最高温度及平均温度由红外热成像测得,环境温度和环境湿度由温湿度计测得。

    表  2  不同时刻肉鸡翅下温度、头部温度及环境温湿度试验数据
    Table  2.  Test data of temperature under wing of broiler, head temperature as well as ambient temperature and humidity at different time
    时刻
    Time moment
    翅下温度/℃
    Temperature
    under wing
    头部最高温度/℃
    Maximum
    head temperature
    头部平均温度/℃
    Average
    head temperature
    环境温度/℃
    Ambient
    temperature
    环境湿度/%
    Ambient
    humidity
    08:0041.036.535.122.045
    09:0041.336.234.922.145
    10:0041.136.835.322.145
    11:0041.136.334.922.145
    12:0041.236.635.222.045
    13:0041.436.535.122.245
    14:0041.536.735.422.245
    15:0040.936.134.622.345
    16:0041.637.035.422.245
    17:0040.836.935.122.045
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    多元线性回归是用来研究1个因变量与2个或2个以上对其有主要影响的自变量之间关系的一种方法。通过PR2来判断回归模型的拟合度和相关性。P越接近0,则自变量与因变量相关性越大[23-24]R2越接近1,则模型的拟合效果越好,预测结果越准确。本模型中共有4个自变量,为了得到准确的预测结果,采用逐步回归方法进行分析,共建立3种多元线性回归模型(表3)。

    表  3  肉鸡翅下温度的预测模型
    Table  3.  Prediction model of temperature under wing of broiler
    模型
    Model
    dfPR2平均差值/℃
    Average
    difference
    140.0010.680.118
    230.0010.480.160
    330.0010.680.123
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    模型1为头部最高温度、环境温度、环境湿度与肉鸡翅下温度的关系。模型2为头部平均温度、环境温度、环境湿度与肉鸡翅下温度的关系。模型3为头部最高温度、头部平均温度、环境温度、环境湿度与肉鸡翅下温度的关系。由表3可知,3种模型的P均为0.001,接近于0,表明4种自变量均与翅下温度相关。模型1与模型3的R2相同且均大于模型2,表明模型1与模型3拟合效果更好,满足多元线性回归分析的要求。模型1与模型3的回归系数(B)及显著性分析如表4所示。

    表  4  模型1和3的回归系数及显著性分析
    Table  4.  Regression coefficients and significance analyses of model 1 and 3
    模型
    Model
    参数
    Parameter
    常量
    Constant
    头部最高温度
    Maximum head temperature
    头部平均温度
    Average head temperature
    环境温度
    Ambient temperature
    环境湿度
    Ambient humidity
    1B22.840.480.03−0.03
    P0.0010.0010.510.001
    3B22.970.470.010.03−0.03
    P0.0010.0010.830.490.001
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    经过显著性分析可知,模型1中常量、头部最高温度和环境湿度的P<0.01,表明其相关性较强,不可去除,变量环境温度的P为0.51 (P>0.05)表明其对因变量影响较小。模型3中常量、头部最高温度和环境湿度的P<0.01,表明其相关性较强,不可去除,变量头部平均温度和环境温度的P均大于0.05,表明其对因变量影响较小,相关性弱。

    表4回归系数可以得到模型1和模型3多元线性回归模型方程为:

    $$\tag{3} {Y} 1=22.84+0.48 x_1+0.03 x_3-0.03 x_4, $$
    $$ {Y} 2=22.97+0.47 x_1+0.01 x_2+0.03 x_3-0.03 x_4 ,$$ (4)

    式中,Y1和Y2为肉鸡翅下温度;x1、x2、x3x4分别为肉鸡头部最高温度、肉鸡头部平均温度、环境温度和环境湿度。

    为了进一步比较模型1与模型3的性能,选取60组测试数据进行拟合。并将预测值与实测值进行对比,计算相对误差。经计算,模型1平均误差为0.118 ℃,平均相对误差为0.28%,最大差值为0.34 ℃。模型3平均误差为0.123 ℃,平均相对误差为0.29%,最大差值为0.35 ℃。对比可知,模型1的拟合度优于模型3,模型1具有更高的精准度,更能反应肉鸡翅下的真实温度。模型1下60组测试数据的实测值与预测值的对比结果如图5所示。

    图  5  线性回归模型1测试组实测值与预测值对比图
    Figure  5.  Comparison between the measured value and predicted value of the test group in linear regression model 1

    多元非线性回归分析是指包含2个以上变量的非线性回归模型。通过上述线性回归分析可知,线性回归分析中模型1性能最好,且头部平均温度对因变量影响最不显著,故而选择对模型1中头部最高温度、环境温度、环境湿度3种自变量进行曲线拟合。选用SPSS软件进行非线性回归分析,采用多项式回归方程建立因变量与自变量的非线性回归数学模型:

    $$ \begin{split} Y=&{a}_0+{a}_1 x_1^2+{a}_2 x_3^2+{a}_3 x_4^2+\\ & {a}_4 x_1 x_3+{a}_5 x_1 x_4+{a}_6 x_3 x_4 \end{split},$$ (5)

    式中,Y为肉鸡翅下温度;a0a1a2a3a4a5a6为非线性模型回归系数;x1x3x4分别为肉鸡头部最高温度、环境温度和环境湿度。

    采用双重迭代的拟合方法利用式(5)对试验数据进行非线性拟合,此方法通过每次迭代中建立的二次规划来确定优化方向,不断把估计参数带入损失函数中求值,以R2和残差平方和进行评定。最终模型函数迭代27次时R2=0.71,残差平方和达到最小值1.192时计算截止。拟合得到肉鸡翅下温度最优预测模型:

    $$ \begin{split} {Y}=&28.421+0.025 x_1^2+0.051 x_3^2+0.01 x_4^2-\\ &0.026 x_1 x_3-0.014 x_1 x_4-0.2 x_3 x_4 。 \end{split}$$ (6)

    选取与线性模型相同的60组测试数据对非线性回归模型进行检验。并将预测值与实测值进行对比,计算误差。经计算,非线性模型平均误差为0.113 ℃,平均相对误差为0.27%,最大差值为0.32 ℃,优于线性模型。非线性回归下60组测试数据的实测值与预测值的对比结果如图6所示。

    图  6  非线性回归模型测试组实测值与预测值对比图
    Figure  6.  Comparison between the measured value and predicted value of the test group in the nonlinear regression model

    由上述分析可知,线性回归模型1的R2为0.68,非线性回归模型的R2为0.71,表明多元非线性回归模型拟合效果优于线性回归模型。对比图5图6可知,图6预测值明显比图5预测值更接近于实测值,根据60组测试数据的误差分析结果,非线性模型优于线性模型,能更准确地预测出肉鸡翅下温度。

    1)本文提出了一种基于深度学习及多元线性回归的肉鸡温度预测方法。利用YOLOv5框架进行深度学习,以笼内肉鸡头部作为ROI训练识别模型,可以准确地提取红外图像中鸡只头部最高温度与平均温度,试验结果表明,该识别模型在测试集中的精准率和召回率分别为93.8%和95.8%。

    2)分别利用多元线性回归模型和多元非线性回归模型对白羽肉鸡翅下温度进行了分析,结果表明,线性回归中模型1(鸡头最高温度,环境温度,环境湿度)平均相对误差与最大差值为3种模型中最低的,分别为0.28%和0.34 ℃,非线性模型平均相对误差与最大差值分别为0.27%和0.32 ℃,在一定程度上2种模型均可满足肉鸡体温测量要求。

  • 图  1   RT-qPCR检测FSTL1基因过表达

    “**”表示与对照相比差异显著(P<0.01,t检验)

    Figure  1.   Overexpression of FSTL1 gene detected by RT-qPCR

    “**” indicates significant difference with the control (P<0.01, t test)

    图  2   RNAi载体干扰结果

    柱子上方不同小写字母表示差异显著(P<0.01,Duncan’ s法)

    Figure  2.   Results of RNAi vector interference

    Different lowercase letters on bars indicate significant difference (P < 0.01, Duncan’ s test)

    图  3   pSilencer 4.1-491干扰后不同时间FSTL1基因的mRNA相对表达量

    柱子上方不同小写字母表示差异显著(P<0.01,Duncan’ s法)

    Figure  3.   Relative mRNA expression of FSTL1 gene after pSilencer 4.1-491 interference

    Different lowercase letters on bars indicate significant difference (P < 0.01, Duncan’ s test)

    图  4   脂肪细胞甘油三酯含量

    “*”表示差异显著(P<0.05,t检验)

    Figure  4.   Porcine adipocytes triglyceride content

    “*” indicates significant difference (P < 0.05, t test)

    图  5   过表达FSTL1基因后脂肪细胞分化相关基因的mRNA相对表达量

    “*”和“**”分别表示与对照相比差异达到0.05和0.01的显著水平 (t检验)

    Figure  5.   Relative mRNA expression of adipocyte differentiation related genes after overexpression of FSTL1 gene

    “*” and “**” indicate significant difference with the control at 0.05 and 0.01 significance levels, respectively (t test)

    图  6   干扰FSTL1基因后脂肪细胞分化相关基因的mRNA相对表达量

    “*”和“**”分别表示与对照相比差异达到0.05和0.01的显著水平 (t检验)

    Figure  6.   Relative mRNA expression of adipocyte differentiation related genes after interference of FSTL1 gene

    “*” and “**” indicate significant difference with the control at 0.05 and 0.01 significance levels, respectively (t test)

    表  1   FSTL1基因shRNA Oligo序列

    Table  1   shRNA Oligo sequence of FSTL1 gene

    Oligo名称
    Oligo name
    Oligo序列1)(5′→3′)
    Oligo sequence
    shRNA-491 Top GATCC CCAGCGAATTTCTGAAATTTTCAAGAGAAATTTCAGAAATTCGCTGGAGA
    shRNA-491 Bottom AGCTTCT CCAGCGAATTTCTGAAATTTCTCTTGAAAATTTCAGAAATTCGCTGGG
    shRNA-530 Top GATCC CCATCAACATCACTACCTATTCAAGAGATAGGTAGTGATGTTGATGGCAA
    shRNA-530 Bottom AGCTTTG CCATCAACATCACTACCTATCTCTTGAATAGGTAGTGATGTTGATGGG
     1) 斜体部分为酶切位点,下划线部分为靶序列,粗体部分为连接的loop结构
     1) The italicized parts are the enzyme digestion sites, the underlined parts are the target sequences, and the bold parts are the connecting loop structures
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    表  2   RT-qPCR引物序列和扩增产物长度

    Table  2   RT-qPCR primer sequences and product length

    基因
    Gene
    引物序列(5′→3′)
    Primer sequence
    产物长度/bp
    Product length
    FSTL1 F:ATCCATCTTTCAACCCTCC 156
    R:TCCCGTTCTGATTCTTTCC
    GAPDH F:TCCCGCCAACATCAAAT 163
    R:CACGCCCATCACAAACAT
    PPARγ1 F:CATTCGCATCTTTCAGGG 134
    R:GGACGCCATACTTTAGGA
    PPARγ2 F:TGGTTGACACCGAGATGC 137
    R:TGGAGTGGAAATGCTGGA
    AP2 F:GACAGGAAAGTCAAGAGCACCA 228
    R:CGGGACAATACATCCAACAGAGT
    LPL F:TGCCCTGTAACTTCTACCCCA 208
    R:GGCAAGTGTCCTCAACTGTGTC
    Adiponectin F:TACCCCAGGCCGTGATGGCA 213
    R:ACCCGAGTCTCCAGGCCCAC
    FASN F:GGGCCCAGCATCACCATAGACA 228
    R:GTTCGTGCCCGCATTGAGGAT
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出版历程
  • 收稿日期:  2019-03-24
  • 网络出版日期:  2023-05-17
  • 刊出日期:  2020-01-09

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